辣椒COI1.2基因的克隆、表达分析和植物表达载体的构建-论文.pdf

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1、2014年27卷4期西南农业学报V0L27N4SouthwestChinaJournalofAgriculturalSciences文章编号：1001—4829(2014)04—1649—07辣椒COH．2基因的克隆、表达分析和植物表达载体的构建黄小云，陈再刚，杨俊年，胡廷章(重庆三峡学院生命科学与工程学院，重庆4O4OOO)摘要：利用RT—PCR技术，通过同源克隆从辣椒中分离到CaCOH．2基因，采用生物学软件对序列进行生物信息学分析，采用实时定量RT—PCR技术分析基因的表达模式。结果表明：克隆到的CaCOH．2基因长度

2、为2041bp，推测其读码框大小为1812bp，编码603个氨基酸。在CaCOI1．2蛋白质N-端有一个F．box结构域，C．端有6个富含亮氨酸结构域。CaCOI1．2蛋白的氨基酸与巳知其他植物COIl蛋白序列有53．o3％-93．37％的一致性。聚类分析结果显示：CaCOII．2与番茄、烟草和葡萄等双子叶植物的亲缘关系较近，而和水稻、玉米、高粱等单子叶植物的亲缘关系较远。CaCOH．2在辣椒的不同生长发育时期的组织中都能表达，在花和青熟期果实中表达水平较高，表明CaCOI1．2在花和果实的发育过程中起重要作用。构建植物表达

3、载体pBI121一CaCOII．2，并导入根癌农杆菌LBA4404中，得到植物转化工程菌，这为下一步用于辣椒等作物的转基因操作、研究CaCOH．2基因在植物中的功能莫定了基础。关键词：辣椒；COH．2；基因克隆；序列分析；基因表达；载体构建中国分类号：$641．3文献标识码：ACloningandExpressionAnalysisofCOl1．2GeneofChiliPepperandPlantExpressionCassettesConstructionHUANGXiao-yun，CHENZai—gang，YANGJun

4、·nian，HUTing—zhang’(SchoolofLifeScienceandEngineering，ChongqingTlIeeGorgesUniversity，Chongqin8404OOO，China)Abstract：Inthispaper，theeDNAsequencesofCaCOl1．2fromChilipepperbyhomologycloningweldclonedwithRT-PCR，thebioinfor-marionofitssequenceswasanalyzedbyusingbiologys

5、oftware，andtheexpressionofCaCOl1．2W&Sdeterminedbyreal-rimequantitativeRT-PCR．TheresultsshowedthatCaCOH．2wl舳2041bpinlength．CaCOl1．2containeda1812-bpopenreadingflameandencodedaputativepolypeptideof503anlinoacids．CaCOI1．2proteinw∞predictedtopossessanF-boxattheN—termin

6、alandsixleucine-riehrepeatsdomainsattheC—termina1．Comparedwithotherspeciesinsequencinganalysis，CaCOI1．2proteinI~luencehad53．03％-93．37％idenrityinanti—noacids．TheresultsofclusteringanalysisshowedthatCaCOII．2hadcloserreh6onwithisolatesfromdicotyledonsuchastomato，tobac

7、coandgrapethanthatfrommonocotyledonsucha8rice，maigeandsr~insorghum．TheCaCOIIgenewa8transcribedindiferenttissueorgansofchilipepper，andtheexpressionlevelofCaCOHinitsflowersandmaturegivenfruitwerehigherthanthatinotheraJljd】r∞edtissueorgan8，andtheseresultsindicatedthat

8、CaCOI1hadanefectonthedevelopmentofflowerandfruit．AfterconstructingtherecombinantvectorpB1121一CaCOI1．2，pBI121-CaCOI1．2Vectorw88introducedintoA．1ws