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《种子特异表达启动子的克隆分析及其植物表达载体的构建》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、华北农学报#2007,22(2):6-10种子特异表达启动子的克隆分析及其植物表达载体的构建1,21,21,21,21,2朱亚兰,姚伟,窦建华,乐超银,何正权,1,21,21,2陈发菊,梁宏伟,梁薇(11三峡大学生物技术研究中心,湖北宜昌443002;21湖北省天然产物研究与利用重点实验室,湖北宜昌443002)摘要:根据GenBank已公布的种子特异性的Oleosin蛋白基因启动子序列设计合成引物,利用PCR技术从油菜总基因组DNA中扩增出Oleosin基因启动子序列(SOP),将该序列克隆到pGM-T
2、载体中,经鉴定获得pGM-T-SOP重组载体。测序和序列分析表明,该启动子序列由899bp核苷酸组成,其核苷酸序列与GenBank中的Oleosin基因启动子序列同源性高达95.6%。分别用限制性内切酶HindÓ和BamHI双酶切重组质粒pGMT-SOP和双元植物表达载体pBI121,分别回收pGMT-SOP重组质粒中的SOP小片段和pBI121植物表达载体中去掉CaMV35S组成型启动子的大片段,经连接、转化和鉴定,获得由SOP驱动报告基因GUS的新型植物表达载体pBI121-SOP,为外源基因在油菜种
3、子中的定位表达研究奠定基础。关键词:种子特异表达启动子;克隆;油菜中图分类号:Q789文献标识码:A文章编号:1000-7091(2007)02-0006-05CloningandAnalysisofSeedsOi-lbody-specificPromoterfromtheBrassicanapusandConstructionofPlantExpressionVector1,21,21,21,21,2ZHUYa-lan,YAOWei,DOUJian-hua,YUEChao-yin,HEZheng-qua
4、n,1,21,21,2CHENFa-ju,LIANGHong-wei,LIANGWei(1.BiotechnologyResearchCenter,ThreeGorgesUniversity,Yichang443002,China;2.KeyLaboratoryofNaturalProductsResearchandDevelopment,Yichang443002,China)Abstract:Apairofprimerswasdesignedaccordingtothesequenceofoleosi
5、nproteinpromoter,whichshowedseedsoi-lbodyspecificity,andafragmentofoleosingeneinthepromoterregionwasamplifiedbypolymerasechainreaction(PCR)usingthegenomicDNAofBrassicanapusastemplate.ThefragmentwasclonedintopGM-Tvector,andanewrecombinedvectornamedpGM-T-SO
6、PwasobtainedafteranalyzedwithPCRandrestrictiondigestion.Theresultsofse-quenceanalysisindicatedthatthisfragmenthad95.6%homologycomparedwiththereportedpromoterinGenbank.AnewplantexpressionvectornamedpBI121-SOPinwhichthereportergeneGUSisdrivedbySOPwasconstru
7、ctedaftercuttingtwovectorspGMT-SOPandpBI121withtworestrictionenzymesHindÓandBamHI,subsequentlyrecoveringthesmallSOPfragmentfrompGMT-SOPrecombinedvectorandthelongfragmentexcisedCaMV35SpromoterfrompBI121plantexpressionvector,andthenligation,transformationan
8、didentification.Andthenfoundationhasbeensetupforfurtherresearchworkinexpressionandfunctionofthispromoter.Keywords:Seedsoi-lbody-specificpromoter;Cloning;Brassicanapus.油菜是重要的油料作物之一,随着分子生物学油菜遗传转化的启动子多属组成型表达启动子如技术的发展,有
