棉花种子特异表达的α球蛋白a基因启动子的表达分析

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1、分类号：Ｓ３３０学校代码：１０７５８■１２３２００４４密级古学号：１０：公开．‘．＇，＇．硕±学位论文．／？．）．－－＇Ｉ．ｉ？ＩＩ．？棉花种子特异表达的ａ球蛋白＾基因启动丰的表注分抗ｒｅｓｓ－ＥｘｉｏｎＡｎａｌｓｉｓｏｆ化ｅＳｅｅｄｓｅｄ打ＣＰｒｏｍｏｔｅｒｏｆｐｙｐ－ａＧｂｂｉＬｉｎＡＧｅｎｅｆｒｏｍＣｏｔｔｏｎＧｏｓｓｉｕｍｈｉｒｓｕｔｕｍＬ．）／（ｙｐ研究生姓名＾导师姓雀及职称陈全家教授合作导师姓名及职称郭王堆研

2、究貢学位口类级别农学硕壬专业４称作物遗传育种研究方向植物基因工程所在学院农学院－ｙ新疆？乌鲁木齐二〇—五年六月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得新疆农业大学或其他教育单位的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：王时间：州年＾月日名关于学位论

3、文使用授权的说明本人完全了解新疆农业大学有关保、：留使用学位论文的规定，即新疆农业大学有权保留送并向国家有关部口或机构交论文的复件电印和子文，、档可采用缩影巧印或扫描等复制手段保存、汇编学位论，文允许论。论文被查阅和借阅本人授权新疆农业大学将学位文的全部或部编分内容入有关数据库进行检索，可布（）公包括刊登论文的全部或部分内容。保的学位论文在解密此后应遵守协议（蜜）．：；！研究生签名：时间年日月心｜史為：文签：＞导师名年时间月日３棉花种子特异表达的α球蛋白A基因启动子的表达分析摘要棉花是世界上必不可少的农作物之一

4、，不仅为纺织工业提供主要的原材料，而且为人类提供所需要的食用油。棉籽可提炼油脂和作为饲料使用，也是棉花基因工程中进行改良的重要目标材料。棉花种子特异性启动子的克隆和分析不仅有助于阐明棉花种子发育和种子特异性基因的表达调控机制，同时也便于利用植物基因工程改良棉花种子。本文采用缺失突变分析启动子的方法，通过把缺失系列启动子转化拟南芥，研究了全长为1640bppαGloA启动子中的相关调控元件，得到了以下结果：1、PαGloA启动子序列分析。利用生物信息学网站对pαGloA全长实行生物信息分析，结果显示其包括TATA-box及CAAT-box，这些是启动

5、子的基本组成元件；还存在6个E-box（CANNTG）、1个G-box(CACGTG)、1个Skn-1motif(GTCAT)、2个RYmotif（CATGCA）和2个DPBFCOREDCDC3motif（ACACNNG），上述功能元件驱动种子的表达必不可少；还有1个SEF1motif、3个SEF4motif、1个ATrichregion和14个（CA）n，这些元件主要与启动子活性相关。根据标记元件在pαGloA全长中的布局情况，使用5’端缺失的方法，将其截断成-1640bp、-1402bp、-684bp、-208bp这4段序列并分别连接GUS基因

6、构建成植物表达载体，分明命名为pαGloA-1640、pαGloA-1402、pαGloA-684、pαGloA-208。2、转基因拟南芥植株的获得。采用侵染花苞的方法把携有目标基因的农杆菌导入到长势良好的WT拟南芥中。用Basta筛选出抗性幼苗，用新的营养土继续培养抗性幼苗。为了避免假阳性植株的出现，对获得的抗性拟南芥植株采用叶片PCR或提DNA的方法再鉴定，获得477bp的GUS基因片段，电泳条带显示已经获得阳性植株。3、对转基因拟南芥不同时期不同器官染色检测。对转基因拟南芥不同时期不同器官组织化学检测，GUS基因只在胚、露白种子和子叶期幼苗表

7、达，而没有在真叶、花苞及其它营养器官表达,证明该启动子是种子表达具有专一性。4、转基因拟南芥阳性单株种子GUS酶活力结果剖析。对转基因拟南芥种子GUS酶活测定结果表明，随着pαGloA启动子的不断截短，它们的表达活性呈现出高-低-高的模式。根据酶活结果推断在-684和-208之间存在抑制启动子活性的负调控元件，具体元件还需进一步的实验证明。在-1402和-684之内具有提高启动子活性的功能元件，这些元件包括SEF1motif、SEF4motif、ATrichregion和（CA）n元件,SEF1motif、SEF4motif和ATrichregio

8、n作为正调控元件，（CA）n可以作为正调控元件也可以作为负调控元件。另外，pαGloA-1640启动子的表达活性明显高于p