棉花ghskip-35基因的克隆与表达分析

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1、棉花学报CottonScience2015袁27渊2冤院111―117棉花35基因的克隆与表达分析**刘凯袁张华崇袁齐放军袁张文蔚袁简桂良(中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室袁北京100193)摘要院以中植棉KV1SSH文库为基础袁从陆地棉中植棉KV1中克隆出来泛素途径35基因袁命名为35遥该基因的开放阅读框全长为1863个核苷酸袁编码620个氨基酸袁含有1个ANK保守结构域遥进化分析表明袁GhSKIP35蛋白与甜橙()的SKIP35蛋白相似性最高遥qRT-PCR分析显示院在接种大丽轮枝菌V991菌系后初期35基因表达量激增袁12h便可达到顶峰袁24～4

2、8h逐渐下降袁推测它在陆地棉抗黄萎病早期防卫反应中起重要作用遥利用VIGS(Virusinducedgenesilencing)技术袁在中植棉KV1中成功地沉默35基因曰对沉默棉株接种大丽轮枝菌V991鉴定显示袁其病情指数为50.75袁而野生型的中植棉KV1和转化空载体棉株的病情指数分别为9.38和11.54遥35基因沉默后袁中植棉KV1对黄萎病的抗性丧失袁表明35基因在陆地棉抗黄萎病的过程中起重要作用遥关键词院棉花曰大丽轮枝菌曰35曰qRT-PCR曰VIGS中图分类号院S435.621文献标志码院A文章编号院1002-7807(2015)02-0111-07院10.11963

3、/issn.1002-7807.201502003**Liukai,ZhangHuachong,QiFangjun,ZhangWenwei,JianGuiliang(100193,)Anewgene,35,wasclonedfromcottoncultivarZhongzhimianKV1,whichwasselectedbyscreeningasup-pressionsubtractivehybridizationlibraryofZhongzhimianKV1.Theopenreadingframe(ORF)was1863nucleotides(nts)longandenc

4、odedaproteinof620aminoacids.TheputativeproteincontainsaconservedANKdomain.TheclonedgenewasmostcloselyrelatedtoSKIP35proteinbyphylogeneticanalysis.Real-timequantitativereversetranscriptionpoly-merasechainreactionshowedthatthe35genewasrapidlyactivatedafterinoculationwith.Geneexpressionreacheda

5、peakat12hpost-inoculation(hpi),andthenitsexpressiongraduallydecreasedwithin24―48h.Itwasas-sumedthat35mightplayanimportantroleinthedefensereactionagainstwilt.Virusinducedgenesilenc-ingwasusedtosilenceendogenousgenesinresistantuplandcottoncultivarZhongzhimianKV1bytargetingafragmentof35.V991was

6、usedtoinoculatesilencedcottonplantstoidentifydiseaseresistance.Theresultsshowedthatthediseasein-dicesofwildtypeZhongzhimianKV1andvectorcontrolplantswere9.38and11.54,respectively.Thediseaseindexofsilenced35plantswas50.75.Theseresultsconfirmedthatthe35genewasrelatedtoVerticilliumresistanceinco

7、tton.cotton;;35;real-timequantitativereverse-transcriptionpolymerasechainreaction;virusin-ducedgenesilencing棉花黄萎病(wilt)属于土传病害袁病主效基因还未见报道遥当利用农杆菌介导的是危害棉花的世界性第一病害袁已成为影响我国VIGS(Virusinducedgenesilencing)沉默棉花中与[1]棉花生产的重要限制性因素遥防治黄萎病的最番茄同源的1基因及其调控因子1尧[2]根本