人睾丸特异表达基因tdrg1 shrna表达载体的构建及其表达

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1、中图分类号UDCIU37．21610硕士学位论文学校代码!Q墨三兰密级公珏人睾丸特异表达基因TDRG1shRNA表达载体的构建及其表达ConstructionofTDRG1shRNAexpressionvectorandstudyontheinterferingeffectofTDRG1shRNAexpressionvectorinNTERA—-2cells作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：彭圣林临床医学外科学湘雅三医院汤育新教授论文答辩日期善啪乙／答辩委员会主中南大学2013年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在

2、导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：掣吼遍年D边日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究

3、所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：熟导师签名日缈粤年勘业日人睾丸特异表达基因TDRGlshRNA表达载体的构建及其表i大还摘要：目的：构建靶向人睾丸基因TDRGl的shRNA重组质粒表达载体，并研究其在人恶性畸胎瘤细胞(NTERA-2)I拘表达。筛选出高效且特异性抑制TDRGl基因表达的重组质粒表达载体，为下一步研究TDRGl基因对睾丸肿瘤生物学行为的作用奠定基础。方法：设计合成有短发夹结构靶位TDRGl基因的寡核苷酸，经退火成双链，克隆至载体pGPU6／GFP／Neo中，构建了TDRGl一

4、shRNA表达载体，得到重组质粒TDRGl．shRNA486，TDRGl．shRNA738，TDRGl．shRNA921和一个阴性对照，转化入JMl09大肠杆菌，抽提质粒，进行酶切和测序鉴定，分别使用LipofectamineTM2000介导转染重组质粒shRNA至人恶性畸胎瘤细胞中，再应用RealTime—PCR法检测转染后人恶性畸胎瘤细胞TDRGlmRNA的表达水平。结果：酶切结果表明，所有质粒均为阳性重组质粒，经基因测序证实，插入的DNA片段的序列与设计序列完全一致。同时筛选到转染TDRGl．shRNA486的人恶性畸胎瘤细胞TDRGl基因的

5、mRNA表达水平明显抑制(p

6、DRGlshRNAexpressionvectorinNTERA．．2cellsAbstract：Objective：ToconstructshorthairpinRNArecombinantplasmidexpressionvectortargetingof田DRGl，anddetectthespecificinterferingeffectofTDRGl．shRNAexpressionvectorinNTERA．2cells．ScreentherecombinantplasmidpGPU6／GFP／Neo．TDRG1一shRNAwhichcan

7、blocktheexpressionof田DRGlgenehigheffectivelyandspecificly．Thenthisstudy1aidthefoundationforfurtherresearchaboutthebiologicalbehaviorroleofthatTDRGlintesticulartumor．Methods：OligosforshorthairpinRNAtargetingforTDRG1weredesignedandconnectedtotheexpressionvectorpGPU6／GFP／Neotocon

8、structtheTDRG1shRNAexpressionvectors．TherecombinantplasmidTDR