木薯MeGWD3基因克隆及植物表达载体构建.pdf

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1、南方农业学报JournalofsoutlIemAgriculture2016，47(7)：1057-1063ISSN2095—1191：CODENNNXAABhttp：／／www．nfnyxb．cornDOI：10．39696：issn．2095-1191．2016．07．1057木薯MeGWD3基因克隆及植物表达载体构建付莉莉，韩冰莹，谭德冠，孙雪飘，张家明+(中国热带农业科学院热带生物技术研究所，海1：2571101)摘要：【目的】克隆木薯葡聚糖水合双激酶(MeGWD3)基因并构建其植物表达载体，为开展木薯MeGWD3基因调控及功能研究提

2、供参考。【方法】采用RT．PCFO：,木薯华南124(SCl24)中克隆MeOWD3基因，对其进行序列分析，并将其连接至改造的pCAMBIA2300载体，构建植物表达载体pCAMBIA2300．MeGWD3。【结果】MeGWD3基因全长3522bp，编码1173个氨基酸。经序列比对，发现MeGWD3基因序列与木薯Phytozome数据库中公布的G肋基因(cassava4．1000497m)只存在2个碱基差异，同源性高达99．94％；与NCBI数据库中收录的木薯GwD基因(JN618460)同源性高达99．0&A，与蓖麻Gw躔因(xM00251

3、8566)同源性达86．00％；成功构建植物表达载体pCAMBIA2300一MeGWD3。【结论】成功构建的植物表达载体pCAMBIA2300可用于MeGWD3基因功能及木薯淀粉代谢研究。关键词：木薯；葡聚糖水合双激酶；克隆；植物表达载体中图分类号：$533文献标志码：A文章编号：2095—1191(2016)07—1057—07CloningandplantexpressionvectorconstructionofMeGWD3geneincassavaFULi-li，HANBing-ying，TANDe-guan，SUNXue-piao，

4、ZHANGJia-ming+(InstituteofTropicalBioteehnologyandBioscience，ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences，Haikou571101，China)Abstract“ObjectivelThepresentexperimentWaSconductedtoclonecassava(Manihotesculenta)glucanwaterdiki-nase(M音GWD3)andconstructitsplantexpressionvector，i

5、nordertoprovidereferencesforfurtherstudyingfunctionandregulationofMeG聊geneincassava．【Method]MeGWD3genewasclonedfromcassavavarietySouthChina124(SCl24)bvRT—PCR，anditssequencewasanalyzed．ThenM舀GWD3genewasligatedintopCAMBIA2300vector，SOastocon．stmctplantexpressionvectorpCAMBIA2

6、300-MeGWD3．【Result]Thefull-lengthcDNAofMeG聊was3522bp，en．coding1173aminoacids．Thesequencealignmentresultsshowedthat．胁GWD3genesharedhomologyof99．94％withitsreferencegene(cassava4．1_000497n1)fromcassavaPhytozomedatabase，onlywithtwobasedifferences，andsharedho．mologiesof99．00％and

7、86．00％withGWDgenesofMan／／]otesculentaCrantzandRicinUScomlllunis．respectively．Fur-tllermore，tIleplaTltexpressionvectorpCAMBIA2300一MeGW粥wasconstructedsuccessfully．【Conclusion】7rheconstruct．edplantexpressionvectorpCAMBIA2300一MeGWD3canbeusedtoresearchMeGWD3genefunctionandcassav

8、astarchmetabolism．Keywords：cassava；glucanwaterdikinase；clone；plantexpressionvector