不同微生物诱导柞蚕溶菌酶基因的表达分析.pdf

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1、lc芒邮冒凹圜2013，39(4)：0695—0701ISSN0257—4799；CN32—1115／SE—mail：CYKE@chin~ourna1．net．cn不同微生物诱导柞蚕溶菌酶基因的表达分析宋佳姜义仁王勇孙影杨瑞生石生林秦利(沈阳农业大学生物科学技术学院，辽宁省昆虫资源工程技术研究中心，沈阳110866)摘要溶菌酶是昆虫体液免疫的重要抗茵蛋白质，在昆虫抵御外源物质入侵过程中发挥重要作用。以柞蚕蛹为材料，采用大肠杆菌(Escherichiacoli)、蛹虫草菌(Cordycepsmilitaris

2、)、柞蚕微孢子虫(Nosemapernyi)及无菌水为诱导源，测定不同外源物质诱导柞蚕蛹血淋巴对溶壁微球菌(Micrococcuslysodeikticus)的抑制活性，并根据柞蚕溶菌酶基因(GenBank登录号：DQ353869)设计引物，利用荧光定量PCR技术分析不同外源物质诱导柞蚕蛹血淋巴中溶茵酶基因的表达变化。4个诱导处理组的柞蚕蛹血淋巴均可以产生抑菌活性，但抑菌效果具有显著差异：诱导后72h柞蚕蛹血淋巴产生明显抑茵效应，抑菌圈直径由小到大依次为无菌水处理组、蛹虫草茵处理组、柞蚕微孢子虫处理组、大肠

3、杆菌处理组，且雌蛹血淋巴的抑茵活性较强。4个诱导处理组柞蚕蛹血淋巴中溶茵酶基因的表达量在诱导后4～8h内迅速上调，雌蛹和雄蛹中的表达量分别在诱导后24h、8～12h达到最大，其中，大肠杆菌诱导溶茵酶基因表达上调迅速，但持续时间短，而蛹虫草茵和柞蚕微孢子虫诱导溶茵酶基因的表达量高。研究结果说明柞蚕的免疫应答时间和免疫相关基因的表达水平因诱导源而不同，雌雄个体之间也有差异。关键词柞蚕；溶菌酶基因；诱导表达；实时荧光定量PCR；抑菌效果中图分类号$885．1；Q786文献标识码A文章编号0257—4799(201

4、3)04—0695—07ExpressionAnalysisofAntheraeapernyiLysozymeGeneInducedbyDiferentMicrobesSONGJiaJIANGYi-RenWANGYongSUNYingYANGRui—ShengSHISheng—LinQINLi(CollegeofBioscienceandBiotechnology，ShenyangAgriculturalUniversity，LiaoningEngineering＆TechnologyRe—searchCe

5、nterforInsectResources，Shenyang110866，China)AbstractLysozymeisanimportantantimicrobialproteinofinsecthumoralimmunityandplaysasignificantroleinresis—tingtheinvasionofexogenoussubstances．ThepupaeofAntheraeapemyitreatedbyEscherichiacoli。Cordycepsmilita—ris，No

6、semapernyiandsterilewaterwereusedasmaterialtodeterminetheantimicrobialactivityofA．pernyipupalhae—mOIymphagainstMicrococcuslysodeikticusuponinductionbyvariousexogenoussubstances．Moreover，thesequenceofA．pemyllysozymegene0GenBankaccessionNo．DQ353869wasusedtod

7、esignprimerstoanalyzeexpressionalvariationoflysozymegeneinA．pemylpupaeinducedbydifferentexogenoussubstancesusingreal—timefluorescencequantitativePCR．TheresultsshowedthathaemolymphofallfourtreatmentgroupscouldgenerateantimicrobialactivityagainstM，lysodeikti

8、cus，andtheantimicrobialefectwassignificantlydifferent．A．pemyipupalhaemolymphdisplayedremarkableantimicrobiaIeffectat72haftertreatment．收稿日期：2013一O1—19接受日期：2013—02—18Thediameterofantimicrobialzonewasintheascend