ApNPV诱导柞蚕脂肪体和中肠组织中3个脂肪酶基因的表达及表达载体构建.pdf

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1、’

2、。0≯2014，40(4)：0639—0647ISSN0257—4799；CN32—1115／SE—mail：CYKE@chinajourna1．net．caApNPV诱导柞蚕脂肪体和中肠组织中3个脂肪酶基因的表达及表达载体构建方素云韩焱李文利(大连理工大学生命与医药学院，辽宁盘锦124221；大连市疾病预防控制中心，辽宁大连116021)摘要根据柞蚕cDNA文库数据设计特异引物，以柞蚕蛹脂肪体cDNA为模板克隆了3个脂肪酶基因，命名为／~ase1462(GenBank登录号：KJ638233)、／~asel501(GenBank登录号：KJ638234)和

3、l~ase1725(GenBank登录号：KJ638235)。3个基因编码的蛋白质具有昆虫脂肪酶家族的保守结构域及活性位点，与家蚕脂肪酶Bmlipase．1有较近的亲缘关系。为探究柞蚕脂肪酶基因的表达调控是否与柞蚕抵抗柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)的侵染有关联，利用实时荧光定量PCR技术检测柞蚕幼虫在感染ApNPV后脂肪体和中肠组织中3个脂肪酶基因的表达水平。结果表明，柞蚕幼虫被ApNPV感染后48—60h，脂肪体和中肠组织中3个脂肪酶基因的表达水平均明显上调，初步推测柞蚕脂肪酶可能与柞蚕对ApNPV侵染的免疫应答有关。分别构建柞蚕脂肪酶基因的原核和真核表达载

4、体，SDS-PAGE检测显示柞蚕脂肪酶基因在原核和真核表达系统中均成功表达，为进一步研究柞蚕脂肪酶的生物学功能奠定了基础。关键词柞蚕脂肪酶；基因克隆；病毒诱导；实时荧光定量PCR；原核表达；真核表达中图分类号$885．1；Q786文献标识码A文章编号0257-4799(2014)04-0639-09‘InduUcCedEI=xpPressilonandEl=xpressiJonVectorsCo0nstrucCtionofThreeLipaseGenesinFatBodyandMidgutofAnteraeapernyibyApNPVFANGSu—Yun’HAN

5、YanLIWen—Li(’SchoolofLifeScienceandMedicine，DalianUniversityofTechnology，Pa响Liaoning124221，Chma；DalianCen~rforDiseaseControlandPrevention，DalianL~onmg116021，Cn『几a)AbstractThreelipasegenesequenceswereclonedanddesignatedaslipasel462rGenBankaccessionNo．KJ638233)，lipasel501(GenBankaccess

6、ionNo．KJ638234)，andlipasel725(GenBankaccessionNo．KJ638235)re．spectivelybyusingcDNAofAnteraeapernyipupaeastemplateandgene-specificprimersdesignedaccordingtoAnter-aeapemyicDNAlibrary．Theirencodedproteinscontainedtheconserveddomainandactivitysiteofinsectlipasesuper—family，whichhascloser

7、relationshiptoBombyxmoillipase一1(Bmlipase一1)．Toinvestigaterelationshipbetweenexpres—sionofthesegenesandinfectionofApNPV．rea1．timefluorescencequantitativePCRwasemployedtodeterminetherela—tiveexpressionIevelsoftheminthefatbodyandmidgutofA几teraeapemyiIarvaeuponinfectionofApNPV．Theresult

8、sshowedthatexpressionlevelsofthesegeneswerealIup—regulatedat48—60hafterApNPVinfection．whichindicatedthatthesegeneswereinvolvedinimmuneresponsetoApNPVinfection．Bothprokaryoticandeukaryoticexpressionvec—torswereconstructedforAn~emeapernyilipasesandSDS-PAGEassayrevealedthattheA几eraeaper

9、nyilipasegen