利用柞蚕核型多角体病毒（ApNPV）表达载体系统在柞蚕蛹中表达人生长激素.pdf

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1、Scienceof5ericulture

2、2014，40(2)：0277-0283ISSN0257—4799：CN32—1115／SE·mail：CYKE@chinajourna1．net．on利用柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)表达载体系统在柞蚕蛹中表达人生长激素叶博王林美赵振军岳冬梅张波李树英范琦(辽宁省农业科学院大连生物技术研究所，辽宁省野蚕重点实验室，辽宁大连l16024)摘要为探究柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)表达载体一柞蚕蛹表达系统用于表达哺乳动物活性蛋白的可行性，利用该表达系统表达医用蛋白人生长激素(hGH)。构建插入hgh基因的

3、转移表达栽体pApM748BE／hgh，将该转移表达载体质粒DNA与病毒ApNPV-Aph／egfp基因组DNA共转染樗蚕(Philosamiacynthiam)培养细胞Pc一01，用末端稀释法筛选获得重组病毒ApNPV—Aph／Aegfp／hgh。采用Westernblotting和ELISA方法，检测到柞蚕蛹感染重组病毒ApNPV—Aph／AegJp'／hgh后第7天体液中就有hGH明显表达；感染后第13～14天蛹体液中的hGH含量保持较高水平，重组hGH的最高表达量可达251．18g／mL；感染后第15～20天仍可以检测到hGH的表达，但表

4、达产物出现降解现象。用活化的人红白血病细胞K562检测利用ApNPV表达载体系统在柞蚕蛹表达的重组hGH的体外活性，结果显示其对K562细胞的增殖具有明显的促进作用。关键词柞蚕核型多角体病毒表达载体系统；柞蚕蛹；人生长激素；体外活性中图分类号Q78；$885．1文献标识码A文章编号0257—4799(2014)02—0277—07ExpressionofHumanGrowthHormoneinAntheraeapernyiPupaUsingAntheraeapernyiNucIeop0lyhedroVirusExpressionVectorSys

5、temYEBoWANGLin—MeiZHAOZhen—JunYUEDong—MeiZHANGBoLIShu—YingFANQi(DalianInstituteofBiotechnology，LiaoningAcademyofAgriculturalSciences，TheKeyLaboratoryonWildSilkwormofLiaoningProvince，DalianLiaoning116024，China)，AbstractTodiscussthepossibilityofusingAntheraeape，丫，／nucleopoIyhed

6、rovirus(ApNPV)一Antheraeape，7／，pupaexpressionsystemtoexpressactiveproteinsinmamals，humangrowthhormone(hGH)formedicalusewasexpressedusingthisexpressionsystem．Thetransfervector，pApM748BE／hgh，wasconstructedandco—transfectedintoPhilosamiacynthiamcells(Pc一01)withthegenomicDNAofApNP

7、V-Aph／egfp．Therecombinantvirus，ApNPV—Aph／Aegfp／hgh，wasobtainedbymodifiedplaquepurification．WesternblottingandELlSAresultsshowedthathGHcouldbedetectedinpupalhaemolymphfrom7dpi(dayspostinfection)ofrecombinantvirusApNPV—Aph／Aegfp／hgh，andmaintainedhighexpressionlevelat3to14dpi，du

8、ringwhichthehighestexpressionlevelwasupto251．18Ug／mLlrhGHexpressionwasdetectablefrOm15to20dpi．buttheexpressedproductstartedtodegrade．TherecombinanthGHexpressedinAntheraeapemyipupaeusingApNPVexpressionvectorsystemcouldobviouslystimulatetheproliferationofK562收稿日期：2013-11—11接受日期

9、：2013—11—22humanerythroleukemiacells．asindicatedbyinvitroac—资助项目：辽宁省