柞蚕核型多角体病毒细胞凋亡蛋白抑制因子的表达及其功能分析

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1、犬－＇；！裡大爱ＤＡＬＩＡＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ工睡硕士室位论文ＭＡＳＴＥＲＡＬＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ＞ｊｙ杵蚕核型多角体病毒细胞凋亡蛋白抑制因子的表达及其功能分析ＬＵ工程领域＾Ｓ＿作者姓名赵盪呈李文利副教授指导教师—－２０１５６答辩日期＿＿．＾＿５＿专业学位硕士学位论文作香核型多角体病毒细胞调亡蛋白抑制因子的表达及其功能分析Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆｉｎｈｉｂｉｔ

2、ｏｒｏｆａｏｐｔｏｓｉｓｒｏｔｅｉｎｐｐｆｒｏｍＡｎｔｈｅｒａｅａｅｒｎｙｉｎｕｃｌｅｏｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓｐｐ作者姓名：赵振军工程领域：生物工程学号：４１３１８０２５指导教师：李文利完成日期：大ｉ嫂工大營ＤａｌｉａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ学位论文独创性声明作者郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除文中已经注明引用内容和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体已

3、经发表的研究成果，也不包含其他巳申请一学位或其他用途使用过的成果。与我同工作的同志对本研究所做的贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。学位论文题目：梏蚕核型多角体病毒细胞调亡蛋白抑制因子的表达及其功能分析作者签名＿日期：上丄年丄月Ｌ日大连理工大学专业学位硕士学位论文摘要细胞调亡是昆虫宿主细胞抗病毒感染及控制病毒复制增殖的一个重要分子机制。杆状病毒细胞凋亡蛋白抑制因子（ＩＡＰ）在调节细胞调亡的过程中起着重要的作用，但其作用的範分子

4、蛋白及机理仍不清楚。柞蚕是我国特有的经济昆虫，受到作香核型多角体病毒ＡＭＮＰＶ的危害，其产量和质量受到直接影响。ＡｐＭＮＰＶ基因组编码两个可能的细胞（ｐ）－Ａ－凋亡蛋白抑制因子ＩＡＰｌ和ＡＩＡＰ２，我们对它们的性质、功能及在柞蚕抗病毒防（ｐＰ）御机制上的作用不了解。本文通过基因表达分析、体外蛋白质相互作用、体内基因干扰等方法分析这两个蛋白质在抑制细胞凋亡过程中的作用。实验结果表明：（１）分析了＋’’－Ａｉ－ｐｉａｐＪ和基因５端和３端非编码区序列；ＡｐＭＮＰＶＪｊ＾／ｉ／ｅｇ步能够感染ＴｎＨ５ａＡ－

5、ｉａ细胞，能够表达ＥＧＦＰ蛋白ｌ２基因在病毒感染早期即有转录表达，；＿ｐ和ｐｐ－－但转录表达水平低于ＤＮＡｐｏｌ基因。（２）体外表达的ＡｐＩＡＰｌ和ＡＰＩＡＰ２都具有蛋白－－ＭＮＰＶ感染质结合能力，ＡｐＩＡＰｌ既能够自身结合，也可以与ＡＰＩＡＰ２结合。（３）ＡｐＴｎ－Ｈ－ｉ５细胞后可抑制放线菌素Ｄ诱导的细胞类ｃａｓｐａｓｅ３蛋白酶活性；ＲＮＡｉ方法证实－ＭＮＰＶ抑制细胞凋亡的作用－干扰Ａ＾ｉａｐｌ基因表达能降低Ａｐ，同时降低Ａｐｉａｐ２和ＤＮＡ－－ｐｏｌ基因转录表达，干扰Ａｐｉａｐ２基因表达也能降低

6、Ａｉａｐｌ和ＤＮＡｏｌ基因的转录表ｐｐ－－达。根据上述结果，我们认为ＡｐＩＡＰｌ在ＡｐＭＮＰＶ抑制细胞凋亡中起作用，ＡＰＩＡＰ２一－ＭＮＰＶ抑制细胞凋亡－参与Ａｐ。ＡｐＩＡＰｌ和ＡＰＩＡＰ２功能不同，但它们有定的关联性，ＤＮＡｏｌ基因表达－ＩＡＰｌ－ＩＡＰ２并共同影响ｐ。本文系统地分析了Ａ和Ａ的特性及在抑ｐＰ一制细胞碉亡中的作用，，同时发现它们在病毒感染复制中的作用并为进步分析其作用。对象提供了线索。为今后深入研究杵香抗病毒机制，开展柞香抗病育种提供了依据关键词－：杵蚕核型多角体病毒ＴｎＨｉ

7、５细胞；细胞调亡蛋白抑制因子；基因干扰；－－Ｉ作蚕核型多角体病毒细胞凋亡蛋白抑制因子的表达及其功能分析ＥｘｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｎａｌｓｉｓｏｆｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆａｏｔｏｓｉｓｒｏｔｅｉｎｆｒｏｍｐｙｐｐｐＡｎｔｈｅｒａｅａｅｒｎｉｎｕｃｌｅｏｏｌｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓｐｙｐｙＡｂｓｔｒａｃｔＢａｃｕｌｏｖｉｒａｌｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆａｏｔｏｓｉｓｒｏｔｅｉｎｌＡＰｌａｓａｎｉｍｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎａｏｔｏｓｉｓ．Ｂｕｔｐｐ

8、ｐ（）ｐｙｐｐｐｔｈｅｔａｒｇｅｔｒｏｔｅｉｎａｎｄｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍａｒｅｓｔｉｌｌｕｎｃｌｅａｒ．ＴｈｅＣｈｉｎｅｓｅｏａｋｓｉｌｋｗｏｒｍＡｎｔｈｅｒａｅａｐｐｅｒｎｙｉ｛Ａ．ｐｅｒｎｙｉ）ｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｅｃｏｎｏｍｉｃｉｎｓｅｃｔ．Ｔｈｅｑｕ