家蚕核型多角体病毒orf75基因的克隆与表达

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1、河南农业大学学位论文独创性声明、使用授权及知识产权归属承诺书学位论家蚕核型多角体病毒ORF75基因的克隆及学位文题目表达级别硕士学生江志伟学科农业昆虫与害虫防治导师姓名专业姓名尹新明学位论文是否保密否如需保密，解密时间年月日独创性声明本人呈交论文是在导师指导下进行的研究工作及取得研究成果，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括为获得河南农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。研究生签名：f，z畚侈砺锄导师签名

2、：／∥扩y’哆日期：泖6年6nla．CJ日期：争形年Z月胂学位论文使用授权及知识产权归属承诺本人完全了解河南农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生必须按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷本和电子版本，并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。本人同意河南农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。本人完全了解《河南农业大学知识产权保护办法》的有关规定，在毕业离开河南农业大学后，就在校期间从事的科研工作发表的所有论文，第一署名单位为河南农业大学，试验材料、原始数据、申报的

3、专利等知识产权均归河南农业大学所有，否则，承担相应的法律责任。注：保密学位论文在解密后适用于本授权书。．研究生潞f≯玉佛新虢绷学院领导虢劾坎辽日期：酬年6月协日日期：，后年石刷口扫日期：o易年6月f怕致谢本文是在尹新明教授和安世恒老师的悉心指导下完成的。两位恩师对论文的选题、设计、完成到论文的写作、定稿都给予了认真指导，使本研究得以顺利完成。三年来尹新明教授在我的学业和生活上倾注了大量的心血和艰辛的劳动，使我的学业得以圆满完成。恩师渊博的学识，博大的胸怀，严谨的治学态度，忘我的工作精神以及宽厚待人的做人准则，让我终生难忘，是我毕生效仿的榜样，在我的论文完成之际，籍此向恩师

4、表达我最崇高的敬意和最真挚的谢意!’在实验完成过程中，河南农业大学原国辉教授、罗梅浩教授、郭线茹教授、蒋金炜副教授、李欣副教授、白素芬副教授、王高平副教授以及温县植保所的王天亮所长都给予了热情的帮助，在此表示衷心的感谢。非常感谢杜孟芳、周洲、温发园、赵特、程茂高、张艳玲、高玉红、李云河、鲁云风、吴少英、薛伟伟、张燕丽、陈冉等师兄师姐们对本实验的指导与帮助。。感谢田彩红、李卫华、邓培渊、李贤庆、李坤、高素霞、崔莉、宋楠、蔡晓明、袁莹华、吴利民、王振军等同学在实验过程中提供的大力支持与帮助。特别感谢师弟涂洪涛在整个实验过程中的合作与帮助，还要感谢本实验室张涛、李富才，师弟刘晓

5、光、申小卫、刘中芳，师妹王冬燕、刘淑梅，病理实验室李成军，王小青、高书峰、赵志、陈静以及赵丹、胡鹏、王振华、王沛在实验中提供的支持与帮助。感谢陈梅娟对我自始至终的支持与鼓励。感谢我的朋友弋明涛、路庆敏、毋晓蕾、吴会锋在实验、学习、生活中给予的帮助和照顾。本实验的顺利完成也离不开院领导、研究生处诸位老师的关心和支持，在此一并表示感谢。值此论文完成之际，特别感谢我的父母、弟弟、妹妹给予我精神和物质上的支持。最后，谨向所有关心、支持和帮助过我的老师、同学和朋友们在此一并表示感谢，同时向参加论文评阅、评议及答辩委员会的专家、教授们致以诚挚的谢意。家蚕核型多角体病毒0RF75基因的

6、克隆及表达摘要根据GenBaIll【发表的序列(醴31殴)设计引物，以家蚕核型多角体病毒为材料，利用PCR技术扩增了编码家蚕核型多角体病毒(BombyxmoriNucleopolyhedrovirus，BmNPV)ORF75基因的DNA片段。将其克隆至pMDl8一Tvector上，获得了该基因成熟蛋白阅读框序列。利用设计的酶切位点将目的基因从T载体上切下。目的片断和表达质粒pGEX-4T-2经BamHI／XhoI双酶切，连接得到重组表达质粒pGEX／Bm75．将重组表达质粒pGEX／Bm75转化入大肠杆菌BL21中，经IPTG诱导表达后，SDS-PAGE分析表明产生57k

7、Da左右的特异蛋白质条带。为了进一步检测表达产物是不是含有与GST融合的蛋白。以MouseAnti-GST为第一抗体，以辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠为二抗，对表达产物进行Westernblotting分析，结果表明，pGEX／Bm75经IPTG诱导产生的57kDa蛋白条带与抗体发生了很强的交叉反应。表明融合蛋白得到了表达．该融合蛋白含有一个GST，可以在对融合蛋白进行亲和层析的同时，结合相应的蛋白酶切割实现目的蛋白的纯化．本实验并对家蚕核型多角体病毒ORF75基因核苷酸序列进行了生物信息学分析，BmNPVORF75基因位于704