扁蓿豆冷诱导基因差异表达分析-论文.pdf

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1、西北植物学报，2013，33(1)：0060—0065ActaBot．Borea1．-Occident．Sin．文章编号：1000—4025(2013)01—0060—06扁蓿豆冷诱导基因差异表达分析张宇，石凤翎，云娜，高霞，伊风艳，蔡丽艳(1内蒙古农业大学生态环境学院，呼和浩特010019；2中国农业科学院草原研究所，呼和浩特010010)摘要：以直立型扁蓿豆幼苗为试验材料，采用cDNA—AFLP技术分析扁蓿豆在低温胁迫诱导下的基因表达差异。结果显示，利用筛选的64对引物组合，对0℃低温处理3～5叶期扁蓿豆幼苗的叶片cDNA

2、进行扩增，共获得549条差异表达的转录衍生片段(TDFs)。选取上调表达较好的43条片段进行克隆、测序、Blastx比对和功能分析，其中32个TDFs的蛋白序列与基础代谢、信号转导、转录因子、防御等功能有关，11个TDFs为假设蛋白、未知蛋白或没有找到一致序列。利用荧光定量PCR对3种不同上调表达差异片段进行验证，结果可从数值上更准确地显示差异片段在低温胁迫过程中的相对表达量。关键词：扁蓿豆；冷诱导；cDNAAFLP；差异表达中图分类号：Q786文献标志码：AcDNA--AFLPAnalysisofCold·-inducedG

3、enesinMedicagoruthenicaZHANGYu，SHIFengling，YUNNa，GAOXia，YIFengyan，CAILiyan。(1CollegeofEcologyandEnvironmentalScience，InnerMongoliaAgriculturalUniversity，Hohhot010019，China；2GrasslandRe—searchInstituteofChineseAcademyofAgriculturalSciences，Hohhot010010，China)Abstract

4、：cDNA—AFLPapproachwasemployedtoanalyzegenesdifferentialexpressionundercoldstresstl—singthethree—fiveleafstageleavesofMedicagoruthenica．Theresultsshowedthat549differentiallyex—pressedtranscript—derivedfragments(TDFs)wereidentifiedbysixtyfourprimercombinations，and43up

5、—regulatedTDFsofthemweresequencedandanalyzed．Blastxanalysisandfunctionalanalysisindicatedthat32TDFsmightparticipateinsenescenceandmetabolismpathways，signaltransduction，transcriptionregu—lation，stressresponsesetc，other11TDFswereshowedhomologytounknownandhypotheticalf

6、unctiongenes．TheqRT—PCRresultsshowedthatitW3Saccuatelyonthenumericalvalueforexpressionofthreedifferentup—regulatedTDFswereinducedbylowtemperaturestress．Keywords：Medicagoruthenica；cold—induced；cDNA—AFLP；differentexpression直立型扁蓿豆[Medicagoruthenica(L．)CV．理，对培育抗寒性牧草品种具有

7、重要意义。cDNA—Zhilixing]是从野生扁蓿豆选育出的高产、高抗牧草AFLP是在AFLP基础上发展起来的一种新的检测新品种，可在苜蓿不易生长的干旱、寒冷地区种植，技术，结合了Rrr_PCR的可靠性、重复性高和AFLP一40℃环境条件下也能安全越冬l_1]，可作为改良的稳定性和高效性等优点，已在水稻、棉花、马铃薯、同属牧草抗逆性的优质基因资源¨4]。因此，分离和烟草、黄瓜等作物的发育、逆境胁迫反应及生理调控筛选扁蓿豆抗寒相关表达基因，研究其抗寒分子机等方面的差异表达基因分析中得到应用l6]。收稿日期：2012—0817；

8、修改稿收到日期：201212-25基金项目：退化及受损生态系统治理恢复与资源综合利用技术研究；内蒙古农村领域科技计划项目(20091401)作者简介：张宇(1983一)，女，在读博士研究生，主要从事牧草遗传育种研究。Email：1109zhangyu@163．corn*通信作