近江牡蛎i-型溶菌酶基因分析及温度对基因表达的影响.pdf

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1、热带海洋学报JOURNALOFTROPICALOCEANOGRAPHY2012年第31卷第6期：69—75近江牡蛎i．型溶菌酶基因分析及温度对基因表达的影响许友卿1，吴卫君1，丁兆坤1，潘志忠2何为2，吴铁军2，陈秀荔2，李咏梅2，蒋伟明21．广西大学水产科学研究所，广西南宁530005；2．广西水产研究所，广西南宁530021摘要：溶菌酶是机体先天免疫系统中一个重要的效应分子，参与机体多种免疫反应。本研究克隆了近江牡蛎Crassostreahongkongensisi-型溶菌酶的保守eDNA序列，

2、并探讨其在不同组织的表达、不同温度对其表达的影响。结果表明，近江牡蛎i一型溶菌酶保守eDNA序列长634bp，包含一个长420bp开放阅读框，编码139个氨基酸；其蛋白序列具有典型的i-型溶菌酶特征，包含特定氨基酸残基序列CL(E／L／R／H)C(I／M)C、部分高度保守序列SCG(P／Y)FQI和酶活性中心位。点(Glu34、Asp45、Ser48、Trp61)；另外，还发现一个新的氨基酸保守序列HNGGPRGC。i一型溶菌酶基因在近江牡蛎消化腺、肌肉、鳃、外套膜、唇瓣等5种组织的表达量以消化腺最

3、高，鳃次之，肌肉最低。i一型溶菌酶基因的表达与温度相关，水温20—25℃，其表达量比较稳定；水温6。C或13℃，表达量都呈下降趋势；在27*C，表达量在整个实验过程都维持一个相对高的水平；在34。C，其表达量在第12小时达到最高，第48小时后急剧下降；表明温度可影响i．型溶菌酶基因表达，从而调节其免疫功能和对外环境的应激反应。关键词：i-型溶菌酶；克隆；表达；温度；近江牡蛎中图分类号：P735文献标识码：A文章编号：1009．5470(2012)06．0069．07Analysisofi-typel

4、ysozymegenefromCrassostreahongkongensisandtheeffectoftemperatureonthegeneexpressionxuYou—q．in91，WUWei-junl，DINGZhao．kunl，PANZhi—zhon92，HEWei2，WUTie-jun2，CHENXiu．1i2，LIYong-mei‘．JIANGWei—min921．InstituteforFisherySciences，GuangxiUniversity，Nanning530004

5、，China；2．GuangxiInstituteofFisherySciences，Nanning530021，ChinaAbstract：Lysozymeisoneoftheimportanteffectorsinvolvedinavarietyofimmuneresponsesininnateimmunesystemoforganisms．Aconservativei-typelysozymeeDNAsequencewasclonedfromCrassostreahongkongensisan

6、ditsexpressionindifferenttissueswasstudied．Theeffectsofdifferenttemperaturesonthegeneexpressionintheexperimentwerealsostudied．Theclonedconservativei-typelysozymeeDNAsequencecontained634bpwitha420bpopenreadingflameandtheeDNAencoded139aminoacids．Anewcons

7、ervativeaminoacidsequence，HNGGPRGC，andthetypicalfeatureswerefoundintheproteinsequenceofthei-typelysozymefromC．hongkongensis，includingspecificaminoacidresiduesequence，CL(E／L／R／H)C(I／M)C，apartialhighlyconservativesequence，SCG(P／Y)FQI，andtheenzymeactivesi

8、te(Glu34，Asp45，Ser48，Trp”)．Real·timequantitativePCRwasusedtoassesstheexpressionpattemofthei-typelysozymegeneinthedigestivegland．muscle，gill，mantle，andlabialpalpsofChongkongensis．Thehighestexpressionlevelofthei-typelysozymegenewasfound收稿