LR型微囊藻毒素对鲢鱼PEPCK基因表达的影响.pdf

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1、124广东农业科学2014年第17期LR型微囊藻毒素对鲢鱼PEPCK基因表达的影响徐育强，张开岳，张勇，蒋骄云，冯龙，许世杰，曲宪成(上海海洋大学水产与生命学院，上海201306)摘要：在前期经LR型微囊藻毒素(MC—LR)处理后建立鲢鱼肝脏组织抑制差减杂交文库的基础上，利用RACE方法克隆了经MC—LR处理后差异表达明显的鲢鱼磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶基因cDNA全长，并对其进行了序列分析，然后通过半定量分析了经MC—LR投与1、5、10h鲢鱼肝脏组织PEPCK表达水平。结果显示：鲢鱼PEPCK基因cDNA全

2、长2605bp，包括101bp的5端非翻译区、564bp的3端非翻译区、1911bp的开放阅读框，编码636个氨基酸。将鲢鱼PEPCK基因cDNA核酸及氨基酸序列与GenBank中已发表的其他几种鱼类的相应序列进行比对，表明鲢鱼1PcK与翘嘴红鲐的同源性最高，其核酸及氨基酸序列的相似性分别达到97％和99％；其次为斑马鱼，同源性均达到90％以上；与星斑川鲽的同源性最差，但核酸及氨基酸序列的相似性也分别达到77％和84％，说明鱼类PEPCK在长期的进化过程中具有很高的保守性。鲢鱼PEPCK具有与草酰乙酯结合的

3、特有结构域以及与GTP三磷酸链结合的激酶1和激酶2基序。另外，鲢鱼投予MC—LR后，肝脏组织PEPCK经过l、5、10h的表达量均有显著升高，说明鲢鱼投予MC—LR1h内该基因即被诱导表达，且在10h内皆维持较高的表达水平。这与微囊藻毒素作用有关，推测与微囊藻毒素解毒过程相关。关键词：磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶；抑制差减杂交；快速扩增cDNA末端；LR型微囊藻毒素中图分类号：Q786文献标识码：A文章编号：1004—874X(2014)17—0124—05MC-LRefectsontheexpressionof

4、PEPCKgenesinthesilvercarpXUYu—qiang，ZHANGKai—yue，ZHANGYong，JIANGJiao—yun，FENGLong，XUShi-jie，QUXian-cheng(CollegeofFisheriesandLifeSciences，ShanghaiOceanUniversity,Shanghai201306，China)Abstract：Inthepresentstudy．RACEwasperformedtoclonethesilvercarpPEPCKcDNA

5、andthesequencewasanalyzed．Underthepreviousworkofconstructionofthesilvercarp．1ivercDNAsuppressionsubtractivehybridizationlibrariesexposedtoMC—LR．Then。seni—quantitativeRT—RCRwasusedtoanalyzethetranscriptionalexpressionofthesilvercarpliverKafterl。5．10hexposed

6、toMC—LR．Theresultsshowedthatsilvercarppossessed2605basepair(bp)nucleotidethatcomprisesdofa5-UTR(un-translatedregion)of101bp，a3-UTRof564bpanda19l1bpopenreadingframe(ORF)whichencoded636aminoacids．Sequenceanalysisshowedthatthenucleotidesandaminoacidssequencei

7、dentityofsilvercarp咫Kwerehighest(97％and99％respectively)withErythroculterilishaeformis，secondlywithDaniorerio(morethan90％)，andlowestwithPlatichthysstellcaus(77％and84％respectively)，implyingthat阳尸Cwashighlyconservedduringthelongcoumeofevolution．SilvercarpPEPC

8、Khascombinedwithoxalylethylspecificdomain，aswellasthreechainphosphateofGTP—bindingkinase1andkinase2motifs．Ontheotherhand．significantincreasesinPEPCKtranscriptionalexpressionwereobservedintheliversofsilvercarp