微囊藻毒素lr对大鼠睾丸支持细胞c-jun、c-fos基因表达的影响及机制研究

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1、重庆医科大学硕士学位论文微囊藻毒素LR对大鼠睾丸支持细胞c--jun、c--fos基因表达的影响及机制研究姓名：余杨申请学位级别：硕士专业：劳动卫生与环境卫生指导教师：詹平201205重庆医科大学硕士研究生学位论文微囊藻毒素LR对大鼠睾丸支持细胞c．jun、c-fos基因表达的影响及机制研究摘要背景与目的微囊藻毒素(mircrocystins，MCs)是由水体中蓝藻类所产生的具有生物活性的单环七肽化合物，具有多种同分异构体，MC．LR是微囊藻毒素中毒性最强的一种。目前蓝藻毒素家族中唯有微囊藻毒素被世界卫生组织(WHO)评估为国际性的健康危险因素，它广泛分布在淡水湖泊及池塘水库中，能

2、导致急性肝损伤并且是活跃的促肿瘤因子，已经被国内外广泛研究。肝肾是其主要的靶器官，目前，MCs引起的生殖毒性的研究报道还很少，且主要是引起一些形态学及激素水平的改变。从细胞及基因水平研究MC．LR对雄性生殖器官的毒作用和机制的报道鲜有见到。本实验拟通过用MC．LR染毒原代SD大鼠睾丸支持细胞，探讨MC．LR对大鼠睾丸支持细胞的毒性作用及对细胞即刻早期应答基因c．fos、c一{眦基因和蛋白表达的影响，阐明MC．LR对支持细胞毒性作用可能的原理及机制。方法在体外分离培养大鼠睾丸支持细胞，并用免疫荧光进行鉴定。设置微囊藻毒素．LR药物组(O．5nM，5nM，50nM，500nM)和对照组

3、(OnM)作用于原代支持细胞。通过分别用MC—LR作用于原代支持细胞24h和鲢科大学硕士研究生学位论文48h后MTT法测定细胞增殖的情况确定合适的作用时间和有效作用浓度；用FCM法测定细胞的凋亡；用RT-PCR法检测c-jun、c—fosmRNA表达；用Westem-blot方法检测c-jun、c．fos的蛋白表达。从而从细胞和基因水平分析MC．LR对大鼠睾丸支持细胞毒性作用及对c-jun、c—fosmRNA及蛋白表达的影响。结果实验结果显示，在MTT法中，微囊藻毒素．LR作用于睾丸支持细胞24h和48h后分别检测发现：作用24h时，低剂量组(O．5nM，5nM)与对照组(0nM)

4、相比其活性无明显变化，而高剂量组(50nM，500nM)的活性明显下降，增殖减慢，且变化具有统计学意义(P

5、n、c-fos基因表达上调，具有统计学意义。Wrestem-blot方法检测到c-jun、c—fos蛋白表达上调，上调结果具统计学意义。结论微囊藻作用于SD大鼠原代支持细胞后引起支持细胞的增殖抑制和细胞凋亡；刺激了c_fos和c-jun基因和蛋白的表达上调，推测c_fos气重庆医科大学硕士研究生学位论文和c-jun表达上调改变转录调节通路而引起支持细胞增殖抑制和促进凋亡，最终导致生殖发育损伤。关键词：微囊藻毒素；支持细胞；c-jun；c—fos4EFFECTOFMICROCYSTINLRONTHEEXPRESSIoNoFC．JUN，C．FoSGENEINTHERATSERTOLIC

6、ELLANDITSMECHANISMSABSTRACTBackgroundandobjectiVeMicrocystins(MCs)，generatedbywatercyanophyta，isakindofsin91ecyclich印tapeptidecompoundswimbi0109icalactiVit；y．MCshasaVanetyofisomers，andMC—LRismemosttoxicofit．AtthepresenttimetheonlycyanobacteraltoxinfamilythathaVebeenint哪ationallyassessedforheal

7、mriskbvtheWHOarethemicrocystins．Itiswidelydistributedin仃eshwaterlakes，pondsandreservoirs，whichcancauseac小eliVer嘶u巧andareactiVetumourpromoters．Nowt11eMCshasbeenextensiVelyresearchedathomeandabroad．“verandkidneyisthemainta玛eto曙aJlofMCs．Th