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《pi3k_akt信号调节腹膜间皮细胞上皮-间充质转分化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中华肾脏病杂志2014年5月第30卷第5期ChinJNephrol,May2014,Vol.30,No.5·363··基础研究·PI3K/Akt信号调节腹膜间皮细胞上皮⁃间充质转分化彭翔刘伏友孙林肖力王铭李军【摘要】目的通过体内外实验探讨PI3K/Akt信号对腹膜透析腹膜间皮细胞上皮⁃间充质转分化（EMT）的调节作用。方法40只12周龄ICR小鼠腹腔置管行腹膜透析，制备腹膜间皮细胞的上皮⁃间充质EMT小鼠模型，成膜后分为PD模型组和对照组。采用实时定量PCR、Western印迹和组织免疫荧光等方法检测腹膜组织磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶（pAkt）的表达及EMT相关蛋
2、白和mRNA的表达[包括紧密连接蛋白（ZO⁃1）、波形蛋白（Vimentin）、纤连蛋白（FN）]。体外实验观察转化生长因子（TGF）β1对人腹膜间皮细胞（HPMCs）Akt磷酸化和核转位及ZO⁃1、Vimentin表达的影响。采用PI3K/Akt抑制剂LY294002预处理和负显性Akt（DN⁃Akt）质粒转染HPMCs，抑制PI3K/Akt信号，观察其对TGF⁃β1诱导的HPMCs细胞ZO⁃1、Vimentin表达的影响。结果与对照组相比，模型组小鼠第28天壁层腹膜组织明显增厚，上皮细胞标志物ZO⁃1mRNA和蛋白表达降低，间充质细胞标志物Vimentin和F
3、N的mRNA和蛋白表达升高，Akt磷酸化水平（pAkt）也明显升高（均P＜0.01）。体外实验发现：TGF⁃β1抑制HPMCs细胞ZO⁃1表达，增加Vimentin和pAkt表达（均P＜0.01），且呈浓度依赖性；LY294002、DN⁃Akt处理可抑制pAkt表达，对TGF⁃β1诱导的HPMCsZO⁃1mRNA和蛋白下调表达有明显回复作用，并抑制TGF⁃β1引起的VimentinmRNA和蛋白的高表达（均P＜0.01）。结论PI3K/Akt信号参与调节PD腹膜间皮细胞EMT，以PI3K/Akt信号为靶点可望为腹膜纤维化的防治提供一种新途径。【关键词】磷脂酰肌醇3
4、⁃激酶；蛋白激酶；腹膜透析；腹膜间皮细胞；上皮⁃间充质转分化PI3K/Aktsignalingregulatesepithelial⁃mesenchymaltransitionofperitonealmesothelialcellsinperitonealdialysisPengXiang,LiuFuyou,SunLin,XiaoLi,WangMing,LiJun.DepartmentofNephrology,SecondXiangyaHospitalofCentralSouthUniversity,NephrologyInstituteofCentralSout
5、hUniversity,HemodialysisandkidneykeylaboratoryofHunanProvince,Changsha410011,ChinaCorrespondingauthor:XiaoLi,Email:1154522719@qq.com【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheroleofPI3K/Aktsignalingintheregulationofepithelial⁃mesenchymaltransition(EMT)ofperitonealmesothelialcells(PMCs)inperit
6、onealdialysisinvitroandinvivo.MethodsThelevelofPhosphorylatedserine/threoninekinaseAktandtheexpressionofEMTassociatedgeneandprotein,includingZO⁃1,VimentinandFN,weremeasuredinmiceEMTmodel.Invitrostudy,phosphorylationlevelandnucleartranslocationofAkt,ZO⁃1andVimentinexpressioninducedbyTG
7、F⁃β1inhumanperitonealmesothelialcells(HPMCs)werealsoobserved.Moreover,HPMCswerepre⁃treatedbyoneofPI3K/Aktinhibitor,LY294002,ortransfectedwithdominant⁃negativeAktplasmidtoinhibitPI3K/Aktsignaling,thenanalyzeditseffectonZo⁃1andVimentinexpressioninducedbyTGF⁃β1.ResultsComparedwiththecont
8、rol,t
