共生菌发酵法酶解魔芋飞粉制备支链氨基酸寡肽.pdf

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1、亿营乌喳物二侄2006!Vol.23No.633Chemistry&Bioen9ineerin9共生菌发酵法酶解魔芋飞粉制备支链氨基酸寡肽赵珊珊I干信湖北工业大学生物工程学院湖北武汉430068摘要分两步制备魔芋飞粉支链氨基酸寡肽先采用开菲尔发酵法预处理魔芋飞粉蛋白得到可溶性肽再用两步酶解法酶解可溶性肽得到支链氨基酸寡肽用凝胶层析分离后的寡肽中支链氨基酸的含量为27.52%达到了支链氨基酸平衡溶液的最适含量25%～65%关键词魔芋飞粉支链氨基酸寡肽酶解中图分类号TC936.1TS201.2文献标识码A文章编号1

2、672-5425200606-0033-03支链氨基酸亮氨酸异亮氨酸缅氨酸属于必需Saccharom$cescarlsbergeatisB8保加利亚乳杆菌氨基酸对人体的生理功能起着重要作用可用于肝性Iactobacillusbulgaricus葡萄酒酵母Saccharom$ces脑病病人的治疗以及中等手术创伤和脓毒病人的恢leuarum嗜热链球菌StrePtococusthermoPhilus均1复自20世纪70年代初期对支链氨基酸的特殊生为湖北工业大学实验室保藏菌种碱性蛋白酶BR600Umg-1武汉华顺生物技

3、理和药理作用有所认识后设计了相应氨基酸混合口服液和输液用于临床而20世纪80年代中期又提出术有限公司木瓜蛋白酶BR650Umg-1广西庞对寡肽小肽尤其是由2～6个氨基酸残基组成的寡博生物技术有限公司葡聚糖G-10凝胶北京恒业中肽的研究从消化道总体来讲寡肽在胃肠道中的消远化工有限公司化吸收比蛋白质游离氨基酸要好且速度较快而且1.1.2试剂寡肽比蛋白质在胃内滞留时间短胃下垂感与腹部胀硫酸按AR天津市福晨化学试剂厂三羟甲基氨满感频度低对小肠吸收面积减少在消化功能受损时基甲烷重庆东方试剂厂浓盐酸AR武汉市化学试2更是如

4、此剂厂氢氧化钠AR天津市化学试剂三厂无水乙醇国内外对支链氨基酸寡肽BCAA的研究报道AR上海振兴化工一厂大多以玉米黄粉大豆鱼类等为原料用魔芋飞粉为1.1.3仪器原料研究支链氨基酸寡肽至今还是空白魔芋飞粉中数显pH计梅特勒-托利多仪器上海有限公含有丰富的氨基酸尤其是支链氨基酸及人体必需的司CS501型超级恒温器重庆试验仪器厂D2F-6020微量元素铁锌铜锰和葡甘聚糖等因此有着广阔的型真空干燥箱上海精宏实验设备有限公司层析柱3应用前景作者在此采用共生菌发酵法酶解魔芋飞1.6cm>100cm上海博通经贸有限公司MC9

5、9-2粉制备支链氨基酸寡肽探讨了相关工艺条件用凝胶型自动核酸蛋白分离层析仪上海沪西分析仪器厂层析分离了产品并检测了其中的氨基酸成分LM17型记录仪贵阳永青示波器厂1.2方法1实验1.2.1预处理1.1材料试剂和仪器采用五菌共生发酵的方法对魔芋飞粉蛋白进行预1.1.1材料处理利用五种菌自身的蛋白酶系降解魔芋飞粉使结魔芋飞粉魔芋系鄂品种花魔芋恩施向发魔芋制构紧密难溶于水的魔芋飞粉蛋白转化为结构疏松可品有限公司黑曲霉AsPergillusniger啤酒酵母溶于水的可溶性多肽收稿日期2006-03-31作者简介赵珊珊

6、1980-女江苏南京人硕士研究生研究方向分子食药生物工程指导老师干信1942-男教授E-mailzss19800912＠163.cOm34赵珊珊等!共生菌发酵法酶解魔芋飞粉制备支链氨基酸寡肽#2006%&6’通过正交实验9以淀粉和粗蛋白转化率为优化指标9优化得到五菌共生发酵的最佳工艺条件为在34C下9黑曲霉保加利亚乳杆菌嗜热链球菌葡萄酒酵母啤酒酵母五菌的种子液以11222的菌种比例和10%的接种量(5mL)接种到pH为6.0的发酵基质(4%的魔芋飞粉)上9摇床发酵(120r.-1)48h发酵液经8000

7、r.min-1冷冻离卜min20min后9用硫酸按盐析法提取可溶性肽图1标准品凝胶层析分离图谱1.2.2酶解[4]Fig.1StandardchromatogramofG-10采用两步酶解法酶解魔芋飞粉蛋白首先加入碱性蛋白酶进行第一步酶解9其产物主要是芳香族氨由图1可以看出9进样后60min开始出第一个基酸为端基的肽段;然后再加入木瓜蛋白酶进行第二峰9为分子量较大的5,-三磷酸腺昔二钠9其峰形较窄步酶解9将芳香族氨基酸水解下来以酶解液的水解峰值明显;240min后开始出第二个峰9为分子量较小度为指标9优化得到

8、了两种酶的最佳酶解条件的酪氨酸9由于酪氨酸难溶于水9所以峰值较小两个碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉蛋白的最佳条件为底峰可以完全分开9分离效果较好物质量分数3.75%9加酶量0.1%9pH9.09温度2.1.2样品凝胶层析图谱(图2)45C9时间5h木瓜蛋白酶酶解魔芋飞粉蛋白的最佳条件为加酶量0.1%9pH7.09温度40C9时间4h酶解后在沸水中加热10min灭活910000r.-1离卜10m