C-myc上调TCRP1表达与舌癌细胞对顺铂耐受相关-论文.pdf

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1、ISSNl007-7626中国生物化学与分子生物学报http：／／cjbmb．bjmu．edu．an2014年3月CNll一3870／QChineseJournalofBiochemistryandMolecularBiology30(3)：272—278C—myc上调TCRP1表达与舌癌细胞对顺铂耐受相关郑国沛¨，易思思，贾小婷¨，贺智敏(广州医科大学附属肿瘤医院肿瘤研究所，广州510095；湖南省儿童医院检验科，长沙410007)摘要我们先前曾报道了舌癌耐药相关蛋白1(tonguecancer．re

2、sistantprotein1，TCRP1)的cDNA克隆，及其在平阳霉素诱导的舌癌耐药细胞系Tca8113／PYM中高表达，而该细胞同时也对顺铂耐受，提示TCRP1可能参与舌癌细胞对顺铂的耐受，但是具体机制目前尚不清楚．本研究证明，TCRP1依赖c—myc的激活机制与舌癌细胞对顺铂耐受相关．生物信息学预测显示，TCRP1启动子存在原癌基因c—myc的结合位点；染色质免疫共沉淀(ChIP)技术证实，c—myc能通过其转录因子结合位点(transcriptionfactorbindingsite，TFBS

3、)与TCRP1启动子结合；利用半定量RT．PCR、蛋白质免疫印迹和MTS实验检测发现，将c-myc质粒导入舌癌细胞Tca8113中过表达，能显著上调TCRP1的mRNA和蛋白表达水平，且细胞对顺铂的耐受性增强；使用c—myc抑制剂或者siRNA沉默Tca8l13／PYM细胞中c-myc，TCRP1的mRNA和蛋白表达水平均下降，且细胞对顺铂的敏感性增强．上述结果提示，转录因子c—myc可与TCRP1基因启动子特异性结合，上调TCRP1的表达，且该基因的表达上调与舌癌细胞对顺铂的耐受相关．关键词舌癌耐药相

4、关蛋白1；c—myc；舌癌；染色质免疫共沉淀(ChIP)；顺铂；化疗耐受中图分类号R739．86C．．myc．activatedTCRP1AssociatesCisplatinResistanceinTongueCancerCellsZHENGGuo．Pei，YISi—Si，JIAXiao．Ting，HEZhi．Min(”CancerResearchCenter，TumorHospitalAffiliatedtoGuangzhouMedicalUniversity，GuangzhOU510095，Chi

5、na”ClinicalLaboratory，Hun0nChildren’SHospital，Changsh0410007，China)AbstractTonguecancer—resistantproteinl(TCRP1)wasfoundhighlyexpressedindrugresistantTca8113／PYMcellline，whichshowedresistancetocisplatin(cDDP)．ResultsimpliedthatTCRP1mightcontributetocDDPr

6、esistanceintonguecancer．However，themechanismwasunclear．Weperformedsemi-quantitativeRT-PCR．WesternblottingandMTSexperiments．Ac-mycbindingsiteonTCRP1promoterwaspredicted，andtestedtobefunctionalbychromatinimmunoprecipitation(ChIP)assay．TCRP1wasfoundupregula

7、tedinc—mychighlyexpressedcellsthatwereresistanttocDDP．Whenc—mycinhibitororsiRNAwasusedtoreduceTCRP1expression，thesensitivitytocDDPreappearedinthetreatedcells．Ourdatasuggestedthatc-myccouldbindtheTCRP1promotertoupregulateitsexpression，whichmightcontribute

8、tocDDPresistanceintonguecancercells．Keywordstonguecancer—resistantprotein1(TCRP1)；c—myc；tonguecancer；chromatinimmunoprecipitation(ChIP)；cisplatin(cDDP)；chemotherapyresistance收稿日期：2013-10．14；接受日期：2013．11-26广东省自然科学基金(No．$201