RASSFlA逆转A549-DDP细胞对顺铂耐受的实验研究-论文.pdf

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1、中国细胞生物学学报ChineseJournalofCellBiology2013，35(4)：417_422http：llwww．cjcb．orgRASSF1A逆转A549_DD田胞对顺铂耐受的实验研究侯玉磊吴艳凤薛成军李凤增罗海霞郑倩陈辉(重庆医科大学附属第一医院检验科，重庆400016)摘要RASSF1A表达下降可能是肺癌对顺铂获得性耐药的主要因素之一。为了寻找预测顺铂对肺腺癌A549细胞化疗敏感性的生物标志，该研究以对顺铂耐药的同NA549．~(A549．DDP)flJ研究对象，利用转染技术上调RASSF1A表达。RT-PCR和Westernblot$~,N转染前后R

2、ASSF1A在mRNA和蛋白水平的表达情况。在不同浓度顺铂作用下，通过MTT法、克隆形成实验检测转染前后细胞活力并计算Ic。和计数克隆形成数。在同一浓度顺铂作用下，流式细胞仪检测转染前后细胞凋亡分数的改变。结果显示：顺铂作用24h后，转染RASSF1A表达质粒~A549．DDP细胞对顺铂Ic50明显低于A549．DDP细胞『(39．9+6．3)gmol／LVS(53．0士5．8)gmol／L，P=-0．036]；不同浓度顺铂连续作用5天后，转染RASS-表达质粒的A549一DDP细胞形成的克隆数明显少于A549一DDP细胞组；在同一浓度顺铂作用下，转染RASSF1A表达质粒

3、的A549DDP凋亡分数明显大于A549一DDP细胞[(7．10i0．01)％VS(3．80m0．18)％，P=0．002]。结果提示，RASSF1A表达下降可能是肺腺癌A549~胞对顺铂获得性耐药的重要因素之一，RASSF1A表达在临床上作为肺癌患者顺铂化疗耐受的生物标志值得进一步研究。关键词肺癌A549．DDP细胞株；RASSF1A表达质粒；顺铂RASSFIAResensitizesA549一DDPCelltoCisplatinHouYulei，WuYanfeng，XueChenNun，LiFengzeng，LuoHaixia，ZhengQian，ChenHui(Cli

4、nicalLaboratories，theFirstAfiliatedHospitalofChongqingMedical己ffChongqing40001~China)AbstractLowexpressionofRASSFiAmaybeacritica、causeforacquiredchemoresistanceoflungcancer．InordertofindabiomarkerpredictingchemosensitivityofA549celltocisplatin，cisplatin—resistanthumanA549cells(A549．DDP)wer

5、echosedandtransfectedwithaRASSFiAplasmidtoenhancetheexpressionofRASsF1A．Semi．quantitativeR●PcRandesternblotanalyseswereperformedtoconfirmtheexpressionofRASSFlAmRNAorproteinbeforeandaftercelltransfect．Exposingtodiferentconcentrationsofcispaltin，MTTassayswereusedtoevaluatecellviabilityandcal

6、culatedtheIC5ovaluetocisplatinbeforeandafter仃ansfectrespectively；Cloneformingtestswereusedtoevaluatedthecloneformingabilitybeforeandaftercelltransfect．Exposingtothesameconcentrationofcisplatinflowcytometricanalysiswasusedtoassessapoptosisbeforeandaftercelltransfect．Theresultsindicated：expo

7、singtocisplatin24h．IC5ovaluetocisplatindecreasedgreatlyinA549_DDPcellwithexogenousexpressionofRASSF1AthanthatinA549一DDPcell[(39．9-m6．3)~tmol／LVS(53．0士5．8)gmol／L，P=-0．036]；Afterexpo—singtocisplatinfor5days，theclonenumberofA549一DDPwithexogenousexpressionofRASSF1