survivin反义寡核苷酸逆转顺铂诱导的人肺腺癌细胞凋亡耐受作用论文

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1、survivin反义寡核苷酸逆转顺铂诱导的人肺腺癌细胞凋亡耐受作用论文【摘要】目的探讨survivin反义寡核苷酸逆转人肺腺癌细胞对顺铂诱导的细胞凋亡耐受的效应。方法1.常规体外培养A549/CDDP细胞，以脂质体包裹的survivin反义寡核苷酸（ASODN）体外转染细胞。2.采用二苯胺反应法（DPA）测定DNA片段化、激酶法检测Caspase3酶活性及流式细胞术检测细胞凋亡率（AI），评价细胞凋亡程度。3.采用MTT法测定细胞存活率和生长抑制率，计算半效抑制浓度（IC50）及耐药倍数（RI）。结果1.单用ASODN转染组DNA片段化比率、细胞凋亡率和Caspa

2、se3相对活性分别增高至(43.55±6.07)%、(34.03±2.25)%和1.1298±0.2502，和各对照组相比较，均有显著性变化（P0.01）；而ASODN和CDDP联用组上述凋亡指标增高更为明显，分别达（76.73±2.04）%、（65.85±5.47）%和1.6805±0.2758（P0.05）。2.转染组A549/CDDP细胞生长抑制显著，单用转染组和联合CDDP组生长抑制率分别增高达59.3%和83.7%（P0.05）。3.ASODN转染后CDDP对细胞IC50由(225.03±10.59)μmol/L减低至(158.84±4.256)μmol

3、/L.freelilyandinhibitorapoptosisfamilyproteins(IAPs),canresultininhibitionofapoptosisinducedbychemotherapyagentsandtherebyconfertodrugresistanceinmalignancies.Regulationofthosegeneexpressionsmayreversetheapoptosisresistancetochemicalagents.Inthepresentstudy,anlungadenocarcinomaA549/CD

4、DPcelllinestoexploreanlungadenocarcinomacells.MethodsA549/CDDPcelllinesedium.survivinASODNmediatedbycytofectininedbyDiphenylamineassay（DPA），caspase3colorimetricassayandfloetry.3（4，5dimethylthiazol2yl）2，5diphenyltetrazoliumbromide（MTT）assayedtodetectthecellviability,halfmaximumi

5、nhibitoryconcentration(IC50)andcisplatinresistantindex(RI)entation,apoptoticindexandCaspase3activityol/Lcisplatincausedfarmoreobviousapoptoticalterationsinthecells,ofentation,AIandCaspase3activityaximuminhibitoryconcentrationofcisplatin225.03±10.59μmol/Lto158.84±4.256μmol/L,11.9to8.3

6、9.Nonsenseoligodeoxynucleotides(NSODN)andliposomehadnoeffectonthecells（P0.05）.ConclusionTransfectionofantisenseoligodeoxynucleotidestargetingsurvivingenecanreducetheapoptosisthreshold,thereaftertogreatextentreverseapoptoticresistanceinducedbycisplatinincisplatinresistanthumanlungaden

7、ocarcinomainvitro.Keya公司。survivinASODN及无义链（NODN）由上海生物工程有限公司合成。Caspase3试剂盒为BioVision公司产品。RNAseA为GIBCO公司产品。余均为国产分析纯试剂。1.3细胞培养人肺腺癌敏感细胞系A549和耐顺铂细胞亚系A549/CDDP培养于含10％新生小牛血清的RPMI1640培养液中，每毫升培养液含青霉素/链霉素均为100U，用5％Na2CO3调节PH值为7.2～7.6，置37℃、5％CO2、饱和湿度的培养箱中培养，每2～3天用0.25％的胰蛋白酶消化传代。1.4体外细胞转染预试验转