创伤弧菌溶细胞素诱导细胞凋亡的研究现状及展望.pdf

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1、国际检验医学杂志２０１５年６月第３６卷第１２期IntJLabMed，June２０１５，Vol．３６，No．１２·１７５９··综述·创伤弧菌溶细胞素诱导细胞凋亡的研究现状及展望江闰德综述，郑里翔审校（江西中医药大学，江西南昌３３０００４）关键词：创伤弧菌溶细胞素；细胞凋亡；综述DOI：１０．３９６９／j．issn．１６７３‐４１３０．２０１５．１２．０５１文献标识码：A文章编号：１６７３‐４１３０（２０１５）１２‐１７５９‐０２创伤弧菌溶细胞素（Vvc）是创伤弧菌唯一分泌至细胞外，线粒体有关，也有

2、其他类似研究报道。有研究者在实验中利用［１］具备创伤弧菌种属特征性的细胞外蛋白质。其由结构基因１．５HU／mLrVvhA作用于人淋巴（JurkatT）细胞３～４h３VvhA编码，相对分子质量为５０８５１×１０，水溶性好，对热不后，JurkatT细胞发生明显的凋亡反应，Capspase‐３酶的活性［２‐３］稳定。创伤弧菌溶细胞素的活性和毒素非常强，是创伤弧达到高峰值，其杀伤效果与杀伤HUVEC及人脐静脉内皮细菌引发细胞、组织损伤的重要毒力因子之一。实验证明，每毫胞株（ECV３０４）相比，对淋巴细胞

3、显得更为敏感。克纯化的Vvc活力可达８１０００溶细胞单位（８１０００HU／mg）。更细致的研究表明，创伤弧菌溶细胞素通过３种方式启动通过小鼠尾静脉注射毫克级以下水平的Vvc，结果可导致试验CytC‐c释放以及Capspase激活的生物化学通路诱导细胞亡：［４］［１７］小鼠的死亡。有关创伤弧菌溶细胞素诱导细胞凋亡的作用（１）Vvc诱导产生超氧阴离子，引起细胞凋亡。Kwon等在以及机制已有大量研究，本文将近年来相关研究作一综述。Vvc作用于ECV３０４细胞的研究中发现，当Vvc的作用浓度达1创伤弧菌

4、溶细胞素诱导细胞凋亡到０．４HU／ml时，ECV３０４细胞出现凋亡，在凋亡的过程中细细胞凋亡或程序性死亡（PCD）是由基因控制的自主性程胞内产生大量超氧阴离子、释放CytC‐c，同时Capspase‐３被激序性死亡。凋亡在形态学上表现为，细胞出现皱缩，胞浆空泡活以及DNA发生了断裂。检测时还发现，凋亡细胞的超氧阴化，胞膜出泡，染色质浓缩和出现凋亡小体等特征性改变。细离子、CytC‐c和Capspase‐３的活性分别在５min、３h和６h达胞发生凋亡的中心环节是激发了蛋白酶组成的级联反应，其过到高

5、峰。进而推测，可能是Vvc可以诱导大量超氧阴离子的程大概分为如下几个阶段：（１）在体内、外因素的作用下，刺激产生，大量的超氧阴离子又可引起线粒体膜的通透性发生变细胞接受凋亡信号；（２）凋亡各级调控分子间起相互作用；（３）化，从而促进了CytC‐c从线粒体中释放、激活Capspase‐３并启蛋白水解酶被活化；（４）最终引起含半胱天冬蛋白酶级联反动了由线粒体损伤引起的CytC‐cCapspase‐９／３途径的细胞凋［５］应。整个过程分启动和执行两个阶段。启动阶段是指细胞亡机制，最终导致DNA片段的断

6、裂、裂解，ECV３０４细胞发生在感受到相应的信号刺激后，细胞内的一系列控制的开关出现凋亡。研究中用超氧阴离子的清除剂TEMPO或线粒体膜通开启或关闭。不同的刺激启动细胞死亡之路的最初方式可能透转运抑制剂环胞素A（CSA）进行预先阻断时，则ECV３０４的不同。其中，有两个通路当前研究的比较清楚：（１）膜受体通凋亡可以得到抑制。同时实验也观察到，如果加入Capspase‐３路，比如Fas‐FasL；（２）细胞色素C（CytC‐c）释放以及Cap‐抑制剂，也可明显抑制细胞的凋亡，但加入Capspase

7、‐１抑制spase激活的生物化学通路。细胞凋亡的执行过程是级联式基剂，细胞凋亡没有任何变化，这表明Capspase‐３是介导Vvc诱因表达的结果，其过程表现为Capspase不可逆性的有限水解导细胞凋亡的关键因子。（２）Vvc介导钙离子内流，诱导细胞底物的级联放大反应。放大途径主要包括两条：由Fas／FasL凋亡。钙离子是细胞凋亡的信号分子，在很多因素诱导的凋亡启动的FADD‐Capspase‐８／３途径和由线粒体损伤引起的的信号转导过程中都扮演着重要的角色。Vvc可以通过在靶［６‐８］CytC

8、‐Capspase‐９／３途径。已有研究表明，创伤弧菌溶细胞细胞膜上的形成微孔，使大量膜外钙离子内流，从而增加膜内素可以诱导人脐静脉内皮细胞、人淋巴（JurkatT）细胞、小鼠的钙离子浓度，启动细胞凋亡的机制；如果加入糖皮质激素或［９‐１４］腹膜巨噬细胞及小鼠肺内皮细胞等细胞的凋亡。同时也钙离子透入剂A２３１８７则可以诱导细胞凋亡证明Vvc是一种［１８］有研究发现，创伤弧菌溶细胞素能诱导肿瘤细胞的细胞凋亡，膜成孔毒素。（３）Vvc可通过刺激细胞形成大量一氧化氮［１５］如人肝癌细胞株（SMMC‐７