金黄色葡萄球菌α溶血素基因的克隆与表达

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1、摘要*溶血素是金黄色葡萄球菌最重要的毒力因子，它可引起多种疾病，奶牛乳房炎的主要致病因子之一就是金黄色葡萄球菌分泌的*溶血素。奶牛乳房炎严重影响牛奶的品质，患牛牛奶中体细胞数大幅增加，会降低乳蛋白、乳糖和乳脂肪的含量，使用抗生素治疗，又会引起大量残留，从而使鲜奶受到体细胞和抗生素的双重污染，严重损害乳制品的质量和风殊。奶牛乳房炎严重阻碍了我国畜牧业的发展，每年均给奶牛业造成巨大的经济损失。由于治疗严重影响牛奶的品质，而且金黄色葡萄球菌非常容易产生耐药性，其引起的感染很难治愈，因此接种疫苗就成为最

2、理想的防制措施；但金黄色葡萄球菌常规疫苗效果不理想。故研常蛙因工程疫苗就成为解决问题的主要途径。本实验使用从奶牛乳房炎奶样中分离到的一株金黄色葡萄球菌致病菌株，采用PCR法扩增出编码成熟蛋白渤素基因的全亭歹0，与pMDlS-T载体相连，构建金黄色葡萄球菌*溶血素克隆质粒，进行测序。结果表明Ⅸ临同源性在99．9％以上，编码的蛋白质氨基酸同源性在99．98％以上，说明金黄色葡萄球菌分泌的毒力因子“溶血素序列高度保守，同源性极高。再将导入克隆质粒的外源片段构建删吲￡达载体质粒，并对表达质粒经砷rG诱导

3、进行表达，用sDs．PAGE电泳分析表达产物。表达产物金黄色葡萄球菌a一溶血素蛋白的分子量约33如‰与天然的金黄色葡萄球菌m溶血素蛋白分子量相近。金黄色葡萄球菌*溶血素蛋白的成功表达，为研制*溶血素的基因工程疫苗奠定了物质基础。关睫词：金黄色葡萄球菌，o一溶血素，奶牛乳房炎，克隆，表达Abst艘IctThegram—p0Sitiveo玛aIlism口印咖，0c。cc淞口z朋淞isam面orbacte^alpamogen．ItisaSsociatedwitllt11eetiologicalofaV

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