资源描述：
《牛乳中金黄色葡萄球菌山东分离株(zfb)β-溶血素(hlb)的克隆,表达及溶血活性分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中国农业科学2009,42(1):324-330ScientiaAgriculturaSinicadoi:10.3864/j.issn.0578-1752.2009.01.042牛乳中金黄色葡萄球菌山东分离株（zfb）β-溶血素(hlb)的克隆、表达及溶血活性分析1,2,3111112杨钦，王长法，杨宏军，杨少华，高运东，仲跻峰，彭广能123（山东省农业科学院奶牛研究中心，济南250100；四川农业大学动物医学院，四川雅安625014；山东省潍坊市昌乐县畜牧局，山东潍坊262404）摘要：【目的】实现牛乳中金黄色葡萄球菌β
2、-溶血素在大肠杆菌中的高效表达,并分析重组β-溶血素的溶血活性。【方法】PCR扩增牛乳中金黄色葡萄球菌山东分离株β-溶血素基因，构建原核表达载体pET32a+/hlb,并在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达，用96孔血凝板测定重组蛋白的溶血效价，以血琼脂平板法检测重组蛋白的CAMP反应。【结果】测序结果表明，扩增片段含有993bp的ORF，可编码含330个氨基酸的成熟蛋白；SDS-PAGE分析重组蛋白表达水平，IPTG诱导后表达的融合蛋白分子量为57kD，表达量占菌体总蛋白的23.9%；溶血效价分析，-13-1金葡菌β-
3、溶血素对绵羊红细胞的溶血效价为278HU·mg，对奶牛红细胞的溶血效价为9×10HU·mg；重组蛋白在血琼脂平板上和无乳链球菌能发生明显的CAMP反应。【结论】成功表达了牛乳中金黄色葡萄球菌β-溶血素，该毒素对奶牛红细胞的溶血活性明显大于绵羊红细胞，显示出牛源金黄色葡萄球菌β-溶血素的特性明显不同于人源金黄色葡萄球菌β-溶血素，为进一步研究其致病与免疫机理、疫苗设计提供了理论基础。此外，重组蛋白还可用来特异性诊断、鉴别无乳链球菌，为兽医临床诊断提供新的方法。关键词：金黄色葡萄球菌;β-溶血素；克隆；表达；溶血活性；CAMP
4、反应Expressionofβ-hemolysinGeneofStaphylococcusaureusStrainsShandong(zfb)andItsHemolyticActivity1,2,311111YANGQin,WANGChang-fa,YANGHong-jun,YANGShao-hua,GAOYun-dong,ZHONGJi-feng,2PENGGuang-neng12(ResearchCenterofDairyCattle,ShandongAcademyofAgriculturalScience,Jinan
5、250100;CollegeofAnimalMedicalScience,3SichuanAgriculturalUniversity,Yaan625014,Sichuan;ChanglePrologueBureau,Weifang262404,Shandong)Abstract:【Objective】Thegenecodingthebeta-hemolysinwasclonedfromStaphylococcusaureusShandongstrainZfb,expressedinEscherichiacoli,andt
6、hehemolyticactivityoftherecombinantproteinwasanalyzed.【Method】hlbgenewasclonedfromgenomicDNAofStaphylococcusaureusbyPCR,andthePCRproductwasinsertedintovectorpET32a+toconstructplasmidpET32a+/hlb,theplasmidwasthenexpressedinEscherichiacoliBL21(DE3)cellsthatinducedby
7、IPTG..Thehemolyticactivitywasevaluatedby96wellmicrotiterV-platesusingpurifiedtherecombinationproteinagainstsheepandbovineerythrocytesandCAMPreactionwithStreptococcusagalactiae.【Result】SequenceanalysisshowedthattheStaphylococcusaureusβ-hemolysingene(hlb)wascomposed
8、of993nucleotidesencodingamaturepolypeptide330aminoacids;SDS-PAGEresultsshowedthattherecombinantproteinswereexpressedininclusionbodiesinEscherichiacoliwi
