肠黏膜屏障损伤对自身免疫性肝炎患者枯否细胞免疫调节功能影响的研究

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1、分类号：R575．1密级：学位类别：科学学位口专业学位团学校代码：10062学号：2010601054学科门类：医学又坪篑科鼻号博士学位论文DOCToRALDISSERTATIoN论文题目：肠黏膜屏障损伤对自身免疫性肝炎患者枯否细胞免疫调节功能影响的研究TITLEStudyontheImmuneRegulatoryFunctionofKupfferCellofPatientswithAutoimmuneHepatitisbytheIntestinalMucosalBarrier一级学科：Il缶床医学二级学科：内科学消化系病论文作者：林睿指导教师：王邦茂教授天津医科大学研

2、究生院二。一三年六月学位论文原创性声明lIIIIIIIIIIIIIIIUlY2396242本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：盛日期：Ⅻ·，年r月弓f日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段

3、保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密II，在年解密后适用本授权书。L—一——本论文属于不保密L剑。(请在以上方框内打“√”)作者签名：坷盎、日期：丑嵋年j月3f日导师签名：趁!美日期：p．，年s月，f日天津医科大学博士学位论文中文摘要背景：自身免疫性肝炎(AIH)发病机制尚未阐明，目前认为是具有遗传易感性个体在环境因素的诱发下丧失了对自身肝细胞的免疫耐受，通过激活多种针对肝脏自身抗原的免疫应答引起了肝脏损伤。而枯否细胞(KC)作为定居在肝脏的巨噬细胞，在免疫耐受的形成和维持中具有重要作用。有研究认为KC被肠源性毒素激活，

4、生物学功能发生改变并释放一系列炎性因子，可进一步造成免疫耐受破坏。因此，明确AIH患者是否存在肠黏膜屏障损伤，细菌移位活化KC并诱导KC出现一系列生物学功能改变，导致免疫耐受缺失，从而启动免疫反应值得进一步探讨。目的：本研究拟评价AIH患者肠黏膜屏障功能，从Toll样受体(TLR)激活的角度研究肠源性毒素活化KC的情况，进一步评价活化的KC细胞骨架相关蛋白、外周血单核细胞吞噬功能及抗原递呈功能的变化情况，明确AIH患者肠黏膜屏障功能破坏及其对KC的影响以及KC生物学功能变化情况，将为揭示KC在免疫反应中的作用提供理论依据，加深其在肠道一肝脏互作中的理解，而且将为深入研究

5、AIH的发病机制提供新的视角和思路。方法：第一部分取我院2012年～2013年诊断为AIH行胃镜检查患者十二指肠降段黏膜组织，并留取患者外周血及粪便标本，同时设健康体检者为对照组。检测肝功能AUl水平；在光镜下及电镜下观察十二指肠黏膜组织结构的病理变化并应用免疫组织化学法分析十二指肠黏膜组织中紧密连接蛋白ZO．1、occludin的表达水平；以细菌16SrDNA荧光定量PCR方法测定粪便中关键细菌的含量；采用鲎珠实验测定血浆内毒素(LPS)水平。第二部分取我院2011年-2013年诊断为AIH行肝活检患者肝组织，同时取非酒精性脂肪性肝病行肝活检患者肝组织设为对照组。采用

6、Westernblot检测肝组织TLR4的表达量；采用免疫荧光双标的方法确定KC上TLR4的表达情况。第三部分采用Westemblot检测肝组织Racl通路上下游VAVl和PAKl的表达量并采用免疫荧光双标的方法明确其在KC上的表达情况；采用梯度离心法获得外周血单个核细胞(PBMC)，用荧光抗体偶联的特异性抗体标记CD80、HLA—DR单核细胞表面分子，用流式细胞仪测定这两种抗原递呈分子在单核细胞表面的表达情况，从而判断单核细胞的抗原递呈能力；单核细胞通过CDl4天津医科大学博士学位论文单克隆磁珠抗体分选获得，将单核细胞与FITC标记的大肠杆菌共培养，利用流式细胞仪评价

7、单核细胞的吞噬能力。结果：第一部分(1)AIH肝功异常组、AIH肝硬化组血清ALT水平较健康对照组均明显升高(AIH肝功异常组VS健康对照组为：263．7+57．2U／LVS22．3士5．7U／L，P=0．000；AIH肝硬化组VS健康对照组为：286．4士36．8U／LVS22．3士5．7U／L，P--0．000)；(2)病理检查发现AIH患者十二指肠黏膜微绒毛受损，变短，密度减低，上皮细胞间隙增宽，胞核固缩，且损伤程度与疾病严重程度一致；(3)AIH肝功正常组、AIH肝功异常组及AIH肝硬化组ZO一1蛋白均存在分布不均，并且胞质染色程