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时间:2019-05-10
《家蚕核型多角体病毒BmNPVBm61、orf74的基因分析》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、江苏大学博士学位论文家蚕核型多角体病毒(BmNPV)Bm61、orf74的基因分析姓名:申红星申请学位级别:博士专业:食品科学指导教师:陈克平20090606江苏大学博士学位论文:家蚕核型多角体病毒(BmNPV)Bin61、orf74配q基因分析PCR显示转染细胞的上清中没有BV产生,和m61的拯救病毒表现出和野生病毒相同的特性。证明Bm61是BV产生的必需基因。进一步分析Bin61缺失不影响病毒基因组复制和gp64的转录。4.off74位于BmNPV基因组的69,987.70,449nt之间,全长462bp,编码154个氨基酸残基,预测分子量大约为17.3k
2、Da。在orf74基因ATG上游9nt处有一个杆状病毒晚期转录基序TTAAG。orf74是AcMNPVorff)l的同源序列,5.or]74的转录分析表明,off74从病毒感染后12h开始转录,一直持续蛰J96h,可能是一个晚期表达基因。利用ORF74与GFP融合对其亚细胞定位进行了观察,发现ORF74的表达集中在细胞核。6.敲除orf74基因后构建了缺失orf74的病毒vBm.ko。vBm.ko在BmN上的复制结果表明:orf74的敲除不影响病毒在BmN细胞上增殖和基因组复制。幼虫分析表明D玎殍的敲除可以延长病毒杀死幼虫的时问,但是病毒的产量没有明显差异。这
3、些结果表明orf74可能足病毒复制的非必须基因,可能与病毒的毒力有关。关键词:家蚕核型多角体病毒,Bm61,off74,基因分析,基因敲除ⅡABSTRACTThefamilyBaculoviridaeisahighiyselectivepathogeninarhropods,mainlyininsectsoftheorderLepidoptera.Sofar,thegenomesof47baculoviruseshavebeensequeneced.Anditisrevealedthat30genesarebaculoviruscoregenesand62ge
4、nesareconservedinLepidopterabaculovirusesafteranalyzingthewholegenomes.Bombyxmorinueleopolyhedrovirusisoneofmoststudiedbaeuloviruses;somegeneshavenotbeencharacterized.Inthisstudy,anon—conservedgenes(orf74)andaconservedgenes(Bm61)inLepidopterabaculovirusesarecharacterized.Thesetwogen
5、eswerecharacterizedfromthetranscription,expression,cellularlocationandknockout.Theobjectofthisstudyistoenhanceourunderstandingofbaculovirusmolecularbiology.Theresultsareasfollowing:1.orf61(Bm61)islocatedatnt61,188—-61,892ofBmNPVgenome,containing399bpandcoding133aawithapredictedmolec
6、ularweightof15.5kDa.Bm61isthehomologysequenceofAcMNPV的orf75.Thelatetranscriptionmotifofbaculoviridae,ATAAGwaslocatedattheupstreamofATG.Andthetranscriptionterminalsignal,AATAAwasfoundatthedownstreamoftheterminalcodon删。2.TheRT—PCRresultsshowedthatBm61geneswastranscribedintheinfectedce
7、llsfrom12hto72h.Bm61fusionproteinwasexpressedusingtheE.coliexpressionsystemandpolyclonalantibodieswereharvested.ThewesternblotanalysisshowedthatBm61wasdetectedintheinfectedcellsfrom12to72h,whichfurthersuggestingthatBin61isalategene.ThedetectedBm61hadamolecularweightof15.5kDa,sameast
8、hepredictedone,whic
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