剪切修复基因xpd抑制pdgf-bb诱导人脐静脉平滑肌细胞增殖的作用及信号机制

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1、分类号：密级：UDC：学号：406520512382南昌大学硕士研究生学位论文剪切修复基因XPD抑制PDGF-BB诱导人脐静脉平滑肌细胞增殖的作用及信号机制InhibitoryEffectsofXPDonHUVSMCProliferationinducedbyPDGF-BBandItsSignalMechanism李青培养单位（院、系）：南昌大学第二附属医院指导教师姓名、职称：李菊香教授申请学位的学科门类：医学学科专业名称：内科学（心血管病）论文答辩日期：2015年5月答辩委员会主席：评阅人：2015年5月

2、一、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件

3、和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按―章程‖规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签字日期：年月日剪切修复基因XPD抑制PDGF-BB诱导人脐静脉平滑

4、肌细胞增殖的作用论文题目及信号机制姓名李青学号406520512382论文级别博士□硕士□院/系/所专业内科学（心血管）E_mail备注：□公开□保密（向校学位办申请获批准为―保密‖，年月后公开）I摘要摘要目的:探讨剪切修复基因XPD（XPD）对血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）诱导血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响及糖原合成激酶-3β（GSK3β）在介导XPD抑制PDGF-BB诱导血管平滑肌细胞增殖中的作用。方法：1、人脐静脉平滑肌细胞株培养，PDGF-BB诱导脐静脉平滑肌细胞增殖模型的建立及各

5、种条件培养。2、PDGF-BB浓度和孵育时间条件的优化，在PDGF-BB终浓度分别为0ng/ml、10ng/ml、30ng/ml、50ng/ml及80ng/ml条件下孵育细胞24h,进行MTT检测；以上得出最佳浓度PDGF-BB，分别孵育细胞0h、12h、24h、36h及48h，进行MTT检测。3、PDGF-BB分别孵育细胞0h、1h、8h、16h、24h、32h、40h及48h，收集细胞，提取细胞蛋白，WesternBlotting检测各组细胞XPD蛋白。4、提取质粒，重组质粒pEGFP-N2／XPD和空

6、载质粒pEGFP-N2。脂质体转染法瞬时转染人脐静脉平滑肌细胞，WesternBlotting检测细胞XPD蛋白的表达。5、将获得的转染重组质粒pEGFP-N2／XPD和转染pEGFP-N2的VSMC细胞，予PDGF-BB孵育。实验分组：（1）空白对照组；（2）pEGFP-N2组；（3）pEGFP-N2/XPD组；（4）PDGF-BB组；（5）PDGF-BB+pEGFP-N2组；（6）PDGF-BB+pEGFP-N2/XPD组。WesternBlotting检测各组细胞XPD、GSK3β、p-GSK3β、C

7、DK4、cyclinD1蛋白的表达，流式细胞仪检测细胞周期。6、重组质粒pEGFP-N2／XPD瞬时转染VSMC，然后给予25μM的GSK3β抑制剂SB216763培养24小时。实验分4组：空白对照组；DMSO组；pEGFP-N2/XPD组；pEGFP-N2/XPD+SB216763组。WesternBlotting检测各组细胞CDK4、cyclinD1蛋白的表达。II摘要7、统计方法：采用SPSS19.0统计学软件分析，实验所得数据以均数±标准差表示。P<0.05为差异有统计学意义。结果：1、PDGF-B

8、B孵育浓度和时间的优化：MTT结果显示，OD492nm值在PDGF-BB浓度分别为10ng/ml、30ng/ml及80ng/ml范围内呈浓度依赖性增高；OD492nm值在PDGF-BB孵育时间分别为0h、12h及24h范围内成时间依赖性增高；选定30ng/ml的PDGF-BB孵育24h进行后续实验。2、PDGF-BB30ng/ml分别孵育细胞0h、1h、8h、16h、24h、32h、40h及48h，Western