gax基因过表达对自体移植静脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

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1、gax基因过表达对自体移植静脉平滑肌细胞增殖的抑制作用湖南中医药高等专科学校附属第一医院412000【摘要】目的：探讨gax基因过表达对自体移植静脉平滑肌细胞增殖的抑制作用，探索治疗移植静脉再狭窄的方法。方法：选用wistar■大鼠40只，按照处理方法的不同，平均分成研究组和对照组。对照组在移植静脉后做空白凝胶处理,研究组则是做重组腺介导gax凝胶涂布处理，观察两组大鼠的mRNA表达、gax蛋白表达情况和平滑肌细胞表型的变化情况。结果：研宄组中的mRNA表达和gax蛋白表达指标均有增高，且显著高于对照组；研究组PCN

2、A表达明显减弱且低于对照组；研究组合成表型和过渡型VSMC数量明显减少，而收缩表型VSMC数量明显高于对照组，两组综合比较，差异显著P<0.05。结论：血管内膜过度增牛.和平滑肌细胞的合成表型有密切的联系，gax基因过表达状态下，其可以明显诱使增殖型平滑肌细胞数量减少，在很大程度上抑制了增殖型平滑肌细胞向内迁移的作用，同时减少了细胞外基质的合成。【关键词】gax基因；移植静脉；平滑肌细胞增殖；抑制作用社会的老龄化和人们饮食结构的变化，使得动脉缺血性疾病和冠心病的发病概率每年都在增长。医学技术的发展，采用静脉移植的治疗

3、方式在临床上的使用频率越来越高。采用静脉移植手术其有一定的局限性，即在早期静脉阻塞的概率有5%-26%,在晚期则达40%之高，发生静脉阻塞的因素主要是血管内膜增生和粥样硬化而使血管狭窄［1］。因此，木文对40只wistar大鼠进行研究，探讨gax基因过表达对平滑肌细胞增殖的影响，现将报告整理如下。1.资料与方法1.1一般资料选用wistar大鼠40只，按照处理方法的不同，平均分成研究组和对照组，各20只。其中，研究组中，雌鼠10只，雄鼠10只，平均体重为(240±50)g;对照组中，雌鼠9只，雄鼠11只

4、，平均体重为(245±55)g;所有大鼠均行自体颈内静脉-颈总动脉移植术。两组大鼠的一般资料差异比较P〉0.05,存在可比性。1.2方法1.2.1治疗方法对照组在移植静脉后做空白凝胶处理，研究组则是做重组腺介导gax凝胶涂布处理，具体处理方法是：行自体颈内静脉-颈总动脉移植术后，在移植动脉和周围吻合的地方涂抹剂量为2×1011v·g/ml的rAVV-Gax和浓度为30%的凝胶［2］。1.2.2检测方法免疫组织化学方法：PCNA抗体染色，采用3%双氧水、50μl免疫动物血清

5、和50μl过氧货物酶阻断液进行15-20分钟的卵育；蛋白印迹方法：电泳缓冲液由14.1g氨基乙酸和3.01gTris两者进行水溶。转印液由ll.lg氨基乙酸和2.3gTris两者进行水溶。取100mg的组织加入溶解缓冲液，操作流程是电泳-转印-封闭-1抗孵育-2抗孵育-检测结果［3］。反转录酶链式反应方法：提取RNA，并对其浓度和纯度进行测定，进行反转录酶链式反应，检测PCR产物。电镜分析法：采用H-600型透射电镜观察VSMC的超微结构。取移植静脉6块，用浓度为2.5%的戊二醛进行固定，并用不同浓度的酒精逐级

6、脱水之后切成薄片，用醋酸双氧铀和柠檬酸铅进行染色后观察［4】。1.3观察指标观察两组大鼠的mRNA表达、gax蛋白表达情况和平滑肌细胞表型的变化情况。1.4统计学方法采用SPSS19.0软件对数据进行统计和分析，用均属差(X±S)表示计量资料，若(P<0.05)则差异比较具有统计学意义。1.结果2.1两组人鼠mRNA表达和gax蛋白表达指标对比情况通过反转录酶链式反应方法，研究组中的mRNA表达和gax蛋白表达指标均有增高，iL显著高于对照组P<0.05,数据见表1。表1两组大鼠移植静脉后mRNA表达和

7、gax蛋白表达指标比较分组研究组对照组gax蛋白表达13.71±3.414.3±2.21mRNA表达33.76±13.4154.31±11.472.2两组大鼠PCNA指标对比情况通过免疫组织化学方法，研究组PCNA表达值为(107.1±37.9)明显减弱且低于对照组的(51.2±26.2)P<0.05。2.3两组大鼠VSMC表型的检测结果对比情况通过电子显微镜，研究组合成表型和过渡型VSMC(平滑肌细胞)数量明显减少，而收缩表型VSM

8、C数量明显高于对照组，两组比较差异显著P<0.05,数据见表2。表2两组大鼠VSMC增殖状态检测结比较过渡型9.1±1.6ll.l±2.3分组VSMC收缩表型合成表型研究组67.6±9.822.2±5.1对照组51.6±11.937.4±8.11.讨论临床上多数