猪轮状病毒的分离鉴定及其环介导等温扩增反应检测方法的建立

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1、密级：论文编号：中国农业科学貌学位论文猪轮状病毒的分离鉴定及其环介导等温扩增反应检测方法的建立IsolationandCharacterizationofPorcineRotavirusfromtheLiaoningProvinceandDevelopmentofLoop-mediatedIsothermalAmplification硕士研宄生：张贺伟指导教师•.武华研究员申请学位类别：农学硕士专业：预防兽医学研究方向：动物疫苗与分子免疫培养单位：特产研究所研宄生院2015年06月Secrecy:No.Chines

2、eAcademyofAgriculturalSciencesDissertationIsolationandCharacterizationofPorcineRotavirusfromtheLiaoningProvinceandDevelopmentofLoop-mediatedIsothermalAmplificationM.S.Candidate：HeweiZhangSupervisor：Prof.WuHuaMajor：PreventiveVeterinaryMedicineSpecialty：AnimalVa

3、ccineandMoleculerImmunologyChineseAcademyofAgriculturalSciencesJune2015独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：丨5■年5月这円关于论文使用授权的声

4、明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，§卩：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：时间：2〇/5年5月IS曰导师签名：时间：M5年S月丨&R中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目猪轮状病毒的分离与鉴定及其LAMP检测方法的建立预防兽医动物疫苗与论文作者张贺伟专业研究方向学分子免疫指导教师武华培养单位（研

5、宄所）特产研宂所硕（博）姓名职称单位专业签名导师评硕导口胡桂学教授吉林农业大学预防兽医学博导■阅硕导口中国农业科学院兰州刘在新研宄员预防兽医学人博导■兽医研宄所答辩主席硕导口钱爱东教授吉林农业大学预防兽医学博导■硕导口军事医学科学院军事王兴龙研宄员预防兽医学博导■兽医研宄所硕导口高丰教授吉林大学预防兽医学博导■答硕导■傅殿国研究员吉林省畜牧兽医总站预防兽医学博导口辩硕导■吉林特研生物技术有吴威研究员预防兽医学博导口限公司委员会议记录（秘书）范琳琳论文答辩时间地点2015年5月17日长春所区七楼会议室摘要轮状病毒（R

6、otavirus）作为一种重要的肠道微生物，能造成多种小动物和新生婴幼儿腹泻。PoRV与PEDV、TGEV并称为引起腹泻的三大病毒。目前，在世界上许多国家和地区均发现轮状病毒可引起相关腹泻疾病，对农业带来了巨大的经济损失。本实验室自2013年到2014年，在全国不同省市和地区采集腹泻样品362份，进行流行病学调查，检测结果显示，362份样品中，PEDV的阳性样品数为223份，阳性率为61.6%,TGEV的阳性样品数为2份，阳性率为0.55%；PoRV的阳性样品数为8份，阳性率为2.2%；PKV的阳性样品数为66份，

7、阳性率为18.23%。将来自江苏省某发病猪场的轮状病毒阳性样品处理并与20ug/mL胰酶等体积混合后接种至MA-104细胞上，盲传8代，细胞出现变圆、拉网、脱落等病变。PCR及测序结果显示为猪轮状病毒，命名为JS株。三次蚀斑克隆纯化后测定TCID50-6.875为10/mL，中和试验用病毒的最佳稀释倍数为150倍，并建立抗体检测方法。JS分离株的VP4基因型与P[7]基因型同源性最高，VP7基因型与G[9]基因型同源性最高。根据A群轮状病毒最新分类方法，JS分离株属于P[7]G[9]型。采用环介导等温扩增技术，建立

8、了一种快速检测轮状病毒的实验方法。结果显示，当反应体系中甜菜碱浓度为0.8M，镁离子浓度为2mM，最佳反应温度为63℃时反应60min，扩增可达最佳效果。且该方法特异性良好，灵敏度为RT-PCR的100倍。可用于现场检测，具有良好的应用前景。关键词：猪轮状病毒，流行病学调查，分离，鉴定，环介导等温扩增IABSTRACTPorcinerotavirusesbe