快速检测非洲猪瘟病毒环介导等温扩增方法的建立.pdf

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1、万方数据SichuanAgriculturalUniversityDISSERTATIoNSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementforMASTERDEGREEConstructionofLoop--mediatedIsothermalAmplificationforRapidDetectionofAfrican一‘1n—Swine一’everVirusWUXulongDirectedbyProf．WangYinYa’an，SichuanChinaJun

2、e2014万方数据论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生妣缈笏削烀加厂晒关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复

3、印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。泓降参只，据知，妒年彳月阳、够下缈叶鹤魄拦滏艇师万方数据中文摘要非洲猪瘟(Africanswinefever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus，ASFV)引起的一种高致病率和死亡率的急性、烈性、接触性的传染病，强毒株感染后导致动物100％的死亡率，而目前针对非洲猪瘟还并没有有效的疫苗给以预防，该病对全

4、球的养猪业造成了巨大的威胁和经济损失。我国目前虽然尚无非洲猪瘟疫病的发生，但是随着日渐频繁的进出口贸易发展，以及人员流动的来往，该病传入我国的可能性也随之增大。为了能及时的检测出非洲猪瘟，预防该病传入我国，因此建立一种快速高效检测非洲猪瘟病毒的实验室诊断方法显得非常重要，本研究在分子生物学的基础上，利用环介导等温扩增(100p．mediatedisothermalamplification，LAMP)快速、简便的特性，建立了一种快速检测非洲猪瘟病毒LAMP方法。本试验根据NCBI己登录的非洲猪瘟K205

5、R基因序列，人工合成该基因质粒作为试验所需模板。通过在线软件，根据LAMP引物设计原理，针对非洲猪瘟病毒K205R基因序列设计了一套特异性引物，在进行反应条件优化后成功建立了非洲猪瘟病毒的LAMP检测方法。通过对反应产物的鉴定分析，灵敏度试验以及和常规PCR方法进行对比，结果表明所建立的非洲猪瘟LAMP检测方法可检出低于lO拷贝数的非洲猪瘟DNA，其灵敏度更高于常规PCR，且特异性和稳定性良好。此方法简单、快速，在恒温水浴锅中63℃反应45min即可完成。反应产物除通过琼脂糖凝胶电泳分析外，还可进行可视

6、化检测，阳性反应管在自然光下变得浑浊，加入荧光染料在紫外灯照下有绿色荧光的出现。正因为LAMP产物能进行可视化检测这一特性，加上反应条件简便，不需要复杂的仪器设备的特点，LAMP已经广泛应用于各种疫病的检测，是一种适用于实验室和现场快速检测的方法。本试验方法的建立为我国预防非洲猪瘟疫病的传入提供了参考。关键词：非洲猪瘟；K205R；LAMP万方数据万方数据ConstructionofLoop—mediatedIsothermalAmplificationforRapidDetectionofAfrica

7、nSwineFeverVirusWUXulong(preventiveVeterinaryMedicine)DirectedbyProf．WangYinAbstractAfricanswinefever(ASF)isahighacutemortalitydiseasecausedbytheAfricanswinefevervirus(Africanswinefevervirus，ASFV)，whichiscausedpotent，contiguousandinfectious．Themortalityo

8、ftheanimalsreachesto100％aftertheinfectionofthevirulentstrain．ThereisnoeffectivepreventivevaccineforAfricanswinefeveratpresent．Theglobalpigindustryisinfluencedbythisdisease，anditcausedahugethreatenandeconomiclosses．Although