应用环介导等温扩增技术（LAMP）快速检测家蚕核型多角体病毒的研究.pdf

《应用环介导等温扩增技术（LAMP）快速检测家蚕核型多角体病毒的研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、应用昆虫学报ChineseJournalofAppliedEntomology2013，50(4)：1013—1019．DOI：10．7679／j．issn．2095—1353．2013．140应用环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测家蚕核型多角体病毒的研究木唐芬芬杨伟克邵榆岚谢道燕廖鹏飞杨海白兴荣(云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所蒙自661101)摘要由家蚕核型多角体病毒(Bombyxmorinucle叩。yhedrosisvirus，BmNPV)侵染家蚕Bombyxmori引起的家蚕核型多角体病(血液型脓病)在养

2、蚕生产中发生较为普遍，对蚕业生产造成重大的经济损失。本研究建立了快捷有效的环介导等温扩增技术(1oop—mediatedisothermalamplification，LAMP)用于快速检测BmNPV，为蚕业生产提供了一个有效检测BmNPV和进行早期诊断的技术。该方法是针对BmNPV的pc38基因的6个区段设计的6条引物用于扩增检测，整个反应在恒温条件63~C下进行25min，扩增产物用电泳法和可视法检测(用SYBRGreenI染色)。结果显示，LAMP检测方法的灵敏度是常规PCR方法的100倍，能检测的范围为21个

3、拷贝。另外，用4．86X100Bs／mL感染4龄起蚕，提取血淋巴DNA为模板，PCR在感染36h后检出病毒DNA，LAMP法能检测感染12h后的样品。关键词家蚕核型多角体病毒，环介导等温扩增技术，早期诊断，蚕业PromptdiagnosisoftheBombyxmorinucleOp0lyhedrOsisvirusbyloop·mediatedisothermalamplificationTANGFen--FenYANGWei-KeSHAOYu·-LanXIEDao-·YanLIAOPeng-FeiYANGHaiBA

4、IXing-Rong(InstituteofSericuhureandApiculture，YunnanAcademyofAgriculturalSciences，Mengzi661101，China)AbstractBombyxmorinucle0polyhedrosisvirus(BmNPV)isadiseaseofsilkwormsthatcausessignificanteconomiclossesinsericulture．Inthisstudy，arobustandsimpleloop—mediatedi

5、sothermalamplification(LAMP)assayforrapiddetectionofBmNPVwasdeveloped；thefirstsuitableforpotentialdiagnosisandforhelpingtomonitorBmNPVinfectionsinsericulture．Asetofsixspecificprimersweredesignedtorecognizethesixdistinctgenomicsequencesofpc38fromBmNPV．Theentirea

6、ssaydurationwas25minunderisothermalconditionsat63oC．TheamplifiedproductswereanalyzedbyelectrophoresisandvisualjudgmentfollowingSYBRGreenIdyeing．TheresultsshowthattheLAMPassayis100一foldmoresensitivethantheroutinePCRassay，withadetectionlimitof21copiesperreaction．

7、TheamountofviralDNAinhaemolymphsampledfromlarvaeatdifferenttimesafterinfectionwasalsoinvestedbyPCRandLAMP．KeywordsBombyxmorinucleop0yhedrosisvirus(BmNPV)，loop—mediatedisothermalamplification(LAMP)，diognosis，sericulture家蚕核型多角体病毒(Bombyxmort‘成的经济损失严重。家蚕核型多角体病毒属于杆n

8、uc1e0p0yhedrosisvirus，BmNPV)是家蚕重要的病状病毒科，核型多角体病毒属，寄生在家蚕的血细原，由BmNPV侵染家蚕Bombyxmori引起的家蚕胞和体腔内各种组织细胞的细胞核中，并在其中核型多角体病(血液型脓病)在养蚕生产中的发形成多角体(Pringle，1999；金伟，2001)。杆状病生较为普遍，特别是在夏秋期蚕病易