表达鼠源glp-2嗜酸乳杆菌的构建及其对ibd模型小鼠的影响

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1、分类号：S852.21单位代码：10193密级：公开学号：2012599硕士学位论文表达鼠源GLP-2嗜酸乳杆菌的构建及其对IBD模型小鼠的影响ConstructionofrecombinedLactobacillusacidophilusinwhichmouseGLP-2expressed作者姓名：白云学位类别：农学硕士专业名称：基础兽医学研究方向：微生物学指导教师：姜云垒教授刘殿峰教授所在学院：动物科学技术学院2015年6月本研究由“国家自然科学基金项目”（No.31272390）和吉林省自然科学基金项目”（NO.201215036）资

2、助，在此表示感谢！TheresearchwassupportedbytheprojectofNaturalScienceFoundationofChina(No.31272390)andtheprojectofNaturalScienceFoundationofJilin(No.201215036).独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用

3、过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）

4、吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要IBD（Inflammatoryboweldisease）是炎性肠病的简称，主要包括溃疡性结肠炎（UlcerativeColitis,UC）和克罗恩病（Crohn'sDisease,CD）。能够明确IBD的发生发展机制才能有效缓解、治疗IBD。遗

5、憾的是，目前为止的已有研究都没有明确IBD的具体发病机制。但是根据临床实践中观察总结的病理表现、检测到的各种病理因素来推断，IBD的发病机制可能与环境、遗传、免疫三方面有关。IBD病程的发展伴随肠道炎症的加剧，会出现肠上皮细胞凋亡，肠粘膜通透性增加，肠上皮屏障功能减弱，同时肠道内菌群比例失衡，致病菌增殖转移等现象，严重时甚至可能导致粘膜出血、溃疡、糜烂，最终引发癌变。益生菌可以调节病理条件下肠道菌群的比例，由此对维护肠内环境稳态有积极作用，而且对病毒和细菌诱导的肠道感染、抗生素诱导的腹泻与免疫病变有不同疗效。嗜酸乳杆菌是一种常见的肠道益生菌

6、，它可以通过调节肠道菌群比例来维护微生态环境，抑制各种有害菌，减少了体内毒素的生成，同时分泌抗生素类物质对致病微生物产生拮抗作用。因此，嗜酸乳杆菌通过维护整个胃肠道的微生态平衡，增强肠道屏障功能，调节相关免疫反应，来维护肠道内环境稳态，在一定程度上达到了治疗IBD的作用。胰高血糖素样肽2（GLP-2）作为一种肠道营养因子，可以促进肠粘膜增殖、抑制其凋亡,从而改善肠道屏障功能,有利于肠道的吸收功能。因此，GLP-2通过刺激隐窝细胞的增殖，间接抑制黏膜上皮细胞的凋亡，增强肠道上皮屏障功能和促进肠道生长，减轻了结肠损伤的严重程度，从而有效抑制IB

7、D的病情发展。本研究根据GLP-2与嗜酸乳杆菌对IBD的治疗作用，通过嗜酸乳杆菌表达外源目的蛋白GLP-2。将GLP-2与嗜酸乳杆菌信号肽重组连接在pMG36e质粒上，通过电转化转入感受态嗜酸乳杆菌中，构成重组嗜酸乳杆菌。结果表明，重组pMG36e质粒中扩增GLP-2基因与基因库公布的一致，并且通过Westernblot检测到重组嗜酸乳杆菌上清液中有GLP-2蛋白表达，然后将成功构建的重组嗜酸乳杆菌应用到IBD小鼠模型中，通过各个生理指标的检测，表明重组嗜酸乳杆菌相比嗜酸乳杆菌对IBD的治疗效果显著增强，因为重组嗜酸乳杆菌能表达GLP-2蛋

8、白，从而增强疗效。重组嗜酸乳杆菌的成功构建为后续研究重组益生菌应用于临床治疗IBD奠定了基础。关键字：炎性肠病；胰高血糖素样肽-2；重组嗜酸乳杆菌；治疗IAbstractInfl