海洋源嗜酸乳杆菌肽聚糖的免疫效应及机理研究

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1、TS241公开分类号：____________密级：______________ＵＤＣ：____________单位代码：______________11646硕士专业学位论文论文题目：海洋源嗜酸乳杆菌肽聚糖的免疫效应及机理研究学号：_________________________1111085041姓名：_________________________王琳珺工程硕士专业学位类别：________________________食品工程专业学位领域：________________________海洋学院学院：_________________________潘道东指导

2、教师：_________________________合作导师：_________________________无论文提交日期：2014年6月13日万方数据AThesisSubmittedtoNingboUniversityfortheMaster’sDegreeImmuneeffectandmolecularmechanismofpeptidoglycanderivedfrommarinesourceLactobacillusacidophilusCandidate：LinjunWangSupervisors：ProfessorDaodongPanFacultyofM

3、arineSciencesNingboUniversityNingbo315211，ZhejiangP.R.CHINADateJune13,2014万方数据独创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得宁波大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。签名：___________日期：____________关于论

4、文使用授权的声明本人完全了解宁波大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。（保密的论文在解密后应遵循此规定）签名：___________导师签名：___________日期：____________万方数据宁波大学硕士学位论文海洋源嗜酸乳杆菌肽聚糖的免疫效应及机理研究摘要本文通过分子鉴定技术和传统鉴定技术的多相结合，探索从海洋浮游生物肠道内快速分离嗜酸乳杆菌的方法；然后对其细胞壁肽聚糖的结构进行系统研究，对其分子结构进行磷酸化修饰，以提高其水溶性和免疫

5、调节活性；最后探讨修饰前后肽聚糖结构的变化和对巨噬细胞免疫因子的影响。主要研究内容如下：1.海洋源嗜酸乳杆菌的筛选及鉴定以不同来源的鱼肠内容物为原料，采用溴甲酚紫—MRS改良培养基进行初筛，得到28株乳酸菌疑似菌株。再利用生理生化和分子生物学手段，从28株疑似菌株中鉴定出2株嗜酸乳杆菌D1和B3。通过DPPH清除率实验，从2株目的菌株中选取较高清除率的菌株D1做进一步的探究。结果表明D1是一株具有高抗氧化能力，并对新霉素、菌必治、丁胺卡那霉素、庆大霉素等常见药物有一定耐药性的优良嗜酸乳杆菌。2.海洋源嗜酸乳杆菌肽聚糖的制备及其酶法水解以上述D1作为嗜酸乳杆菌研究菌种，利用传

6、统的TCA法分离提取此菌的细胞壁肽聚糖。为了增加肽聚糖的溶解性以便其更好的发挥效益，将提取出的肽聚糖溶于变溶菌素-溶菌酶混合液中，以不溶物含量为指标，通过响应面法筛选出酶解的最佳工艺，并将原肽聚糖作为对照组，分析最佳工艺的抗氧化能力。结果分析得出嗜酸乳杆菌肽聚糖的最优酶解工艺为：变溶菌素/溶菌素(μg:mg)的添加比例为20/1，酶解pH为6.00，酶解温度为41℃，酶解时间为16h。并且在提高超氧化物歧化酶的活力与抗超氧阴离子的能力上，酶解优化组制备的肽聚糖比原肽聚糖的效果更显著。3.海洋源嗜酸乳杆菌肽聚糖的磷酸化修饰及其结构分析在80℃的条件，采用混合磷酸盐（5％三聚磷

7、酸钠，2％三偏磷酸钠，pH=6.0）对最优酶解工艺条件下制备出的小分子肽聚糖进行修饰，得到磷酸化肽聚糖。结合高效液相、核磁共振、红外光谱、电镜以及质谱对磷酸化肽聚糖的结构做进一步分析。结果表明肽聚糖磷酸化后其表面亲水性及粘附性均有一定增强，磷酸根连接于C环的OH根上，与文献报道的磷酸根共价修饰一致。4.海洋源磷酸化嗜酸乳杆菌肽聚糖的免疫效应研究I万方数据宁波大学硕士学位论文以Raw264.7巨噬细胞为模型，依次将LPS（0.1g/ml）、肽聚糖（50g/ml）、不同浓度的磷酸化肽聚糖（25g/ml、50g/