嗜酸乳杆菌胞壁肽聚糖的免疫调节效应与机理研究

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1、；龍号：Ｑ８１９／７．２１０密级公开＾’若巧苑乂学，嗎网；命ｎｒ告Ｉ屆＠ｋｄｎＳ嗜酸乳巧菌胞壁肤聚糖的免疫调节效应．嘆参＾ｉ－驅位；麵懼Ｊ－圆：生物学ＩｍＢｍ）：鮮遲＾＾ＨＨ２０１５２２０日ｋ完成时间：年月ＪＭＩｍＨＩ答辩时间：２０１５年５月巧日心其鶴批二巧龄ｖ＾與纖学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师指导下进巧的研究工作和取得的硏究成果。本论文中除引文外，所有实验、数据和有关材料均是寡实的。本论文中除引文巧致谢的内容外，不包含其

2、他人或其它机构已经发表或撰写进的研究成果。其他同志对本研究所做的责献均邑在论文中作了声明并表示了谢意。？八学位论文作者签名：日期：，哀捉学位论文使用授权声明研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属南京师范大学。学校有权保存本学位论文的电子和纸质文档，可借阅或上网公布本学位论文的部分或全部内容、复印等＾保存、，可采用影巧汇编本学位论文。学校可Ｗ向国家有关祝关或机构送交论文的电子和纸质文档。（保密论文在解密后遵守此规定），允许论文被查阅和借阅保密论文注释：本学位论文属于保密论文；俱，密级密

3、期限为。年、、学位论文作者签名；指导教师签名；桃奔日觀日觀＾摘要一乳酸菌作为类重要的肠道定植型益生菌，被广泛的应用于发醇食品中，尤，，泡菜等，，其是酸乳干酪。同时关于肠内郭酸菌与宿主健康的密切关系也越来越多的被国内外微生物学家阐述。ｅｔｉｄｏｌｃａｎＰＧＮ），肤聚糖（ｐｐｇｙ，作为革兰氏阳性细菌细胞壁的主要成分其基本结构是由Ｎ－乙酷葡糖胺与Ｎ－乙醜胞壁酸通过－３１４，，糖昔键连接并在重复的（单元之间通过四肤或者五化的桥连结构构成的多聚网络结构。其中，ＰＧＮ的重复二糖结构Ｎ－己醜葡

4、聚糖和胞壁酸Ｓ－内醜胺残基大约占据了ＰＧＮ成分的５０％。ＰＧＮ一作为种免疫増强剂，对其在诱导有关免疫调控因子的释放来刺激免疫系统发挥其抗感染、抗肿瘤等生物效应方面的研究已初见端倪，但其激活巨唆细胞的具体信号通路仍不清晰一，它在免疫系统中的作用机理也有待进步探索。对ＰＧＮ的高效分离利用，将对生物病害防治提供更多更可靠的天然生物免疫强化剂。肠道益生菌细胞壁ＰＧＮ的免疫学研究，目前主要集中在双歧杆菌ＰＧＮ方面。ＰＧＮ－－婴儿型双歧杆菌的能促使小鼠腹腔巨幢细胞分泌多量的ｍ１、止６和ＰＴＮＦ－ａＰＧＮ可Ｗ对；同时部分研究

5、发现双歧杆菌的完整机体免疫系统产生不同程度的免疫调节作用，激活巨嗤细胞从而抑制多种肿瘤的发生。嗜酸ａ杆菌Ｌａ一ｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ，ＬａｃｉｄｏｈＵｉｉｓ作为种重要的肠道益生菌，通过调节（ｐ）肠道免疫系统，增强机体非特异性免疫功能，对机体健康具有重要作用。本实验一室已从海洋鱼类肠道分离出种抗氧化型嗜酸乳杆菌，并对其进斤了相关前期研究。结果发现其有较高的ＤＰＰＨ清除能力（２４．４２％），且对新霉素、菌必治、Ｔ胺一定耐性卡那霉素、庆大霉素等常见药物有。本课题利用分离出的作为研究对象，通过

6、微生物发酵技术，分离纯化得到Ｚ．ａｃＷｏｐＭｗ的ＰＧＮ成分。但由于ＰＧＮ过高的聚合度，限制了其溶解度，从而对其发挥免疫活性产生了重要的障碍。我们采取了部分水解的方法，提ＰＧＮ一Ｚ．高了的溶解度，在定程度上增强其在免疫活性方面的活性。在分离纯化■础－－化ＰＧＮ的研究中，利用ＨＰＬＣ，ＮＭＲＦＴＲＩ，ＭＡＬＤＩＴＯＦ／ＴＯＦ如细胞壁，及氨基酸成分分析，确定菌株的细胞壁ＰＧＮ结构单体为－－－－－－－－－－ＮＡＧ３１４ＮＡＭＬＡｌｌａＤＧ山ＬＬｓＤＡａ。（，）ｙ（通过在ＬＰＳ诱导小鼠巨唆细胞ＲＡＷ２６４．７炎症模型

7、中，采用蛋白质印迹（Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔｉｎｇ傳验，发现ＰＧＮ聚合物，ＰＧＮ水解产物Ｗ及ＰＧＮ单体成分对ＬＰＳ引起的炎症反应具有较好的抑炎调节功能－乙醜胞壁酸。而且抑炎活性ＷＮＮＡＭ）的作用ＮＦ－）（最为显著。在对核转录因子（ｋＢ通路及丝裂原活化蛋白ｒａ化民４与ＮＦ－激酶（ＭＡ：）途径的深入研究中，发现ＮＡＭ的抑制作用是通过ＫｂＩ＾－－，通过３８ＭＡＰＫ激酶通路信号途径的相互交互Ｐ，抑制ＮＦ姐的核转录，限制炎一症因子的表达来实现的。在进步的研究中，，我们利用系统蛋白组学的研究方法同位素相对标记与绝对定

8、量（ｒｍＡ）技术发现了巧信号途径与Ｐ８－ＭＡＰＫ途径Ｑ３２＋－的相互关系。ＮＡＭ处理组中，ＮＡＭ通过上调内质网ＣａＡＴＰ酶（ＳＥＲＣＡ）在的表达，调节与内质网上ＳＥＲＣＡ