六味地黄通络方对人m14黑色素瘤细胞的增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响

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1、目录1六味地黄通络方对人M14黑色素瘤细胞的增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61．4材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．5结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯181．6讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯321．7结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯451．8参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯461．9英汉缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯512致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯523黑色素细胞相关的研究进展(综述)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53

3、IIIIIIIIIIIIHIIIIIIIIIIIIIIUIY2384921六昧地黄通络方对人M14黑色素瘤细胞的增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响摘要目的：观察六味地黄通络方对人M14黑色素瘤细胞的增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响，以初步探讨该

4、方治疗白癜风的机制。方法：(1)人含药血清的制备：选取5名健康志愿者，在服药前一天空腹采取静脉血10ml；志愿者连续服药3天，每天2次，在末次服药后1小时采血静脉血20ml，制备血清。(2)购入人M14黑色素瘤细胞，正常培养并完成细胞传代操作。(3)MTT法检测含药血清对人M14黑色素瘤细胞增殖活力的影响：细胞传至第三代时，并呈对数生长状态时，将细胞接种至96孔板，分为A、B、C、D、E5组。在细胞贴壁后，5组细胞分别给予人正常血清、5％含药血清、10％含药血清、20％含药血清和阳性对照药物干预；继

5、续生长72h，MTT法检测各组细胞活力。(4)酪氨酸酶活性的检测：取对数生长期的人M14黑色素瘤细胞接种至96孔板，分组干预同上，培养72h后，采取L．DO．PA氧化法检测各组细胞中酪氨酸酶活性。(5)黑色素含量测定：将人M14黑色素瘤细胞接种至6孔板中，分组干预同上，继续培养72h后，经NaOH裂解法测定各组细胞中黑色素的含量。(6)半定量PCR检测各组药物处理后TYRP．1和MITF的基因表达：各组细胞处理因素同前，按RT-PCR试剂盒步骤检测各组细胞中TYRP．1和MITF的基因的表达。(7)

6、采用SPSS19．0统计软件对实验数据完成分析。结果：(1)M14细胞在正常条件培养细胞生长较好，传代培养成功。(2)MTT检测结果：实验药物血清组及阳性对照组A490值均高于正常血清组，差异具有统计学意义(尸

7、组与B和D组相比较，均数值最大，且PO．05，无统计学意义；10％含药血清组对M14黑色素瘤细胞酪氨酸酶活性影响最大。(4)对M14细胞黑色素含量的影响：NaOH裂解法测得A400值中，各含药血清组均高于正常血清组，C组与A组间P<0．05，E组与A组间PO．05，差异无统计学意义；即10％含药血清组促进黑色素的合成最为显著。(5)R1pPCR的结果：六味地

8、黄汤通络方含药血清能促进M14细胞中TYRP．1和MITF的mRNA表达，10％含药血清对TYRP．1mRNA的表达作用最显著，对MITFmRNA表达的影响最强的是20％含药血清组。结论：(1)六味地黄通络方能促进M14黑色素瘤细胞的增殖，其影响与含药血清浓度呈正相关。(2)六味地黄通络方能增强M14黑色素瘤细胞酪氨酸酶的活性，10％含药血清组作用最强。(3)六味地黄通络方能促进M14黑色素瘤细胞黑色素的合成。(4)六味地黄通络方促进黑色素合成途径相关的基因TYRPl和MITF的表达，在分子生物学水

9、平证明六味地黄通络方能促进黑色素合成。关键词：六味地黄通络方、人M14黑色素瘤细胞、增殖、，酪氨酸酶活性、黑色素合成TheaffectofLiuweiDihuangTongluoFangonProliferationofhumanM14melanomacells，tyrosinaseactivityandmelaninsynthesisAbstract：objective：ToobservetheaffectofLiuWeiDiHuangTongluoFangonM1