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时间:2018-07-10
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1、维A酸对人类恶性黑色素瘤A375细胞增殖的影响 【Abstract】AIM:ToinvestigatetheeffectsofdiverseretinoidsandreceptoragonistsininhibitingproliferationofhumanmelanomacelllineA375.METHODS:HumanmelanomacelllineA375eter.RESULTS:BothretinoidsandTTNPBinhibitedtheproliferationofA375c
2、ells,butMAhadnosucheffect.Atallconcentrations(10-5,10-6and10-7mol/L)in24hand10-5mol/Lin48and72h,TTNPBhadthemostpool/Lin24and48h,TTNPBhadthemostpoanmelanomacelllineA375.ItisnottheactivationofRXRbuttheactivationofRARthatmayberelatedtotheseeffects. 【Key
3、elanoma;A375cells;celldivision 【摘要】目的:研究维A酸(RA)抑制人类恶性黑色素瘤A375细胞增殖的作用.方法:用RA(atRA,13cisRA和9cisRA)、MA(RXR激动剂)及TTNPB(RAR激动剂)处理培养的人类恶性黑色素瘤A375细胞.用MTT法研究这些试剂对细胞增殖的影响,用流式细胞仪研究这些试剂对细胞周期的影响.结果:RA和TTNPB均可抑制A375细胞的增殖,而MA无此作用.在作用24h时的不同浓度(10-5,10-6和10-7mol/L)以及
4、作用48和72h的10-5mol/L浓度时,TTNPB的抑制增殖作用均强于其它试剂处理组(P<0.05).细胞周期分析结果显示RA和TTNPB均可诱导A375细胞G0/G1期阻滞,而MA无此作用.在作用24和48h时的10-5mol/L浓度时,TTNPB的诱导G0/G1期阻滞作用均强于其它试剂处理组(P<0.05).结论:RA可抑制人类恶性黑色素瘤A375细胞的增殖,并诱导G0/G1期阻滞.RA的这些作用与RXR的激活无关,而可能与RAR的激活有关. 【关键词】维生素A酸类;黑色素瘤
5、;A375细胞;细胞分裂 0引言 恶性黑色素瘤是常见的皮肤恶性肿瘤,近年来发生率有增长趋势[1],但至今尚无有效的治疗方法.维A酸(RA)能够抑制多种恶性肿瘤细胞株的生长,并且可诱导其向正常细胞分化[2].RA在体内主要是通过RA受体(RAR)和RAX受体(RXR)发挥多种生理或药理学作用的.然而,RA抑制肿瘤细胞增殖的作用与RAR和RXR的关系至今尚不清楚.本实验中,我们研究了3种RA和2种RA受体激动剂对人类恶性黑色素瘤A375细胞株的抑制作用. 1材料和方法 1.1材料 人类恶性黑
6、色素瘤A375细胞株(西安交通大学第二医院皮肤科冉立伟博士惠赠).全反式RA(atRA)、13顺RA(13cisRA)、9顺RA(9cisRA)、Methopreneacid(MA,RXR激动剂)、TTNPB(RAR激动剂)、二甲基亚砜(DMSO)购于美国Sigma公司.所有RA以10-2mol/L浓度溶于DMSO,-70℃避光保存.MTT购于中山公司.细胞培养所需的主要试剂为Gibco产品.高通道多功能微板测试系统(德国BMG公司).FACSCalibur型流式细胞仪(美国BD公司). 1.2
7、方法 人类恶性黑色素瘤A375细胞于含100mL/L胎牛血清RPMI1640(含1×106u/L青霉素和1×106u/L链霉素)中培养.在37℃,50mL/LCO2条件下进行细胞培养.当细胞生长达到70%~80%融合时,胰酶消化并传代细胞.将处于对数生长期的细胞接种于96孔培养板,于细胞培养箱中孵育4h后取出,加入各种试剂及100mL/LFBSRPMI1640.每孔液体总量最终为200μL,试剂终浓度为1×10-5,1×10-6或1×10-7mol/L.每孔细胞数为1×104个.设对照组(只加细
8、胞不加试剂)和空白对照组(只加100mL/LFBSRPMI1640).每组设3个平行孔.将培养板移入细胞培养箱孵育24,48或72h.取出培养板,每孔中加入MTT20μL后再次孵育4h,弃上清液后每孔加入DMSO150μL.高通道多功能微板测试系统中振荡5min后在570nm波长处检测A值.重复实验3次.另将细胞种于6孔培养板,于细胞培养箱中孵育4h后取出,避光加入各种试剂及100mL/LFBSRPMI1640.每孔液体总量为4mL,试剂终浓度为1×10-5mol/L,每孔细胞数为
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