麻疯树叶提取物对恶性黑色素瘤A375细胞增殖抑制及诱导凋亡作用的研究

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1、麻疯树叶提取物对恶性黑色素瘤A375细胞增殖抑制及诱导凋亡作用的研究作者：李星，唐琳，雷蕾，刘娟，陈放【摘要】　　目的研究麻疯树叶提取物对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响。方法用MTT法测定不同浓度麻疯树叶提取物对体外培养的人恶性黑色素瘤A375细胞增殖的抑制作用，采用倒置显微镜观察细胞形态学的改变，并用Annexin-V-FIFT/PI双染色法检测细胞的凋亡。结果麻疯树叶提取物能抑制A375细胞增殖，诱导其凋亡，引起细胞形态学的改变，这些影响呈药物浓度剂量依赖性，并与药物作用时间正相关。结论麻疯树叶提取物在体外对

2、人恶性黑色素瘤A375细胞的增殖具有显著的抑制作用，并能诱导其发生凋亡。【关键词】麻疯树；黑色素瘤A375细胞；细胞增殖；细胞凋亡　　Abstract：ObjectiveToinvestigatetheanticancereffectsofextractfromleavesofJatrophacurcasL．ontheinhibitionofcellproliferationandapoptosisinductioninhumanmelanomacelllineA375invitro.MethodsTheA375cellsw

3、asculturedwithdifferentconcentrationofextractfromleavesofJatrophacurcasL.ThecellproliferationinhibitionofA37512cellsweremeasuredbymethylthiazolyltetrazolium(MTT)colorimetricassay.ThemorphologicalchangesofA375cellswereobservedbythelightmicroscope.Thecellapoptosisrat

4、iowasassessedbyFlowCytometrywiththeAnnexin-V-FIFT/PIaffinityassay.ResultsExtractfromLeavesofJatrophacurcasL．significantlyinhibitedtheproliferationofA375cellsanditinducedcellapoptosisandmorphologicalchangesindose-andtime-dependentmanners.ConclusionExtractfromleaveso

5、fJatrophacurcasL．caninhibitthecellproliferationandinducecellapoptosisofmalignantmelanomacells.　　Keywords：JatrophacurcasL.;A375cells;Malignantmelanomacells;Cellproliferation;Cellapoptosis　　麻疯树为大戟科(Euphorbiaceae)麻疯树属（Jatropha）植物，在亚洲、非洲和美洲的热带和亚热带地区广泛分布。其果仁富含油脂，可用于生产生物

6、柴油，是近年来非常热门的生物能源作物，目前在我国川西干热河谷及贵州、云南、广东、广西、福建大量种植［1］。同时麻疯树还是一种很有价值的药用植物，据《中华本草》记载，其叶和树皮可治跌打瘀肿，骨折疼痛，关节挫伤，创伤出血，麻疯，疥癣，湿疹，癞头疮，12下肢溃疡，脚癣，阴道滴虫［2］。已有国内外研究报道其杀虫［3］、杀螺［4］、抗菌［5］、抗病毒［6］、抗HIV［7］等活性，同时国外在对与麻疯树同属的棉叶麻疯树、大根麻疯树的研究中已发现具有抗肿瘤活性［8～10］，但目前对麻疯树抗癌活性的研究报道很少。在前期进行的预实验中发现，麻疯

7、树叶提取物对体外培养的卵巢癌细胞SKOV3、人肝癌细胞HepG2、Hela细胞、肺腺癌细胞株A549、胃腺癌细胞SGC-7901在光镜下观测未表现出抑制作用，而对黑色素瘤细胞A375表现出一定的抑制作用。为探讨麻疯树叶提取物是否具有抗恶性黑色素瘤的作用，本研究通过体外培养的黑色素瘤A375细胞为研究对象，观察麻疯树叶提取物对黑色素瘤A375细胞的增殖和凋亡的影响，旨在为进一步深入研究麻疯树的抗肿瘤机制提供实验依据。　　1材料与仪器　　1.1药物麻疯树叶采自四川省西昌市麻疯树种植基地，阴干，取1kg干燥的麻疯树叶粉碎，于60%

8、乙醇中室温浸泡3d，过滤，滤液加活性碳脱色，过滤除去活性碳，将滤液减压浓缩至饱和，并冻干成粉末备用，提取物得率约9.8%。临用前用无血清的培养基配成实验所需浓度的工作液，无菌过滤备用。　　1.2肿瘤细胞株12　　恶性黑色素瘤A375细胞株（由四川大学华西医学院免疫学实验室提供）。　　1.3