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时间:2019-02-25
《asiaⅰ型fmdv+vp1蛋白原核表达及条件优化》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、新疆农业大学硕士学位论文AsiaⅠ型FMDVVP1蛋白原核表达及条件优化姓名:魏婕申请学位级别:硕士专业:预防兽医学指导教师:符子华;冉多良20090601AsiaI型FMDVVPl蛋白原核表达及条件优化摘要口蹄疫(Footandmouthdisease,FMD)是由口蹄疫病毒(Footandmouthdiseasevirus,FMDV)引起的偶蹄动物发生的高度接触性的传染病。由于其爆发会对畜产品进出口带来严重影响,造成全球经济的巨大损失,因此被世界动物卫生组织(Worldorganizationforanimalhealth,OI功列
2、为A类家畜传染病之首。vPl蛋白是口蹄疫病毒的结构蛋白,是主要的中和抗原位点,可以诱导动物机体产生中和抗体,对机体产生保护性反应。本实验将AsiaI型FMDVVPl基因通过与pGEM.T载体连接,得到连接质粒pGEM.KZ.VPl,经过菌落扩增、酶切回收纯化VPl基因片段,将其与原核表达载体pET-28a连接,成功构建重组表达载体pET28.KZ/03VPl。将重组载体转化至大肠杆菌BL21中,用不同的IPTG浓度及不同诱导时间诱导菌株表达VPl蛋白,分析不同IPTG浓度及不同诱导时间对蛋白表达量的影响,以确定最佳表达条件。结果表明,在
3、一定范围内,随IPTG浓度的增高,表达量并不会随之增大;而在固定诱导时间内,随诱导时间的延长,表达量会随之增大。最后确定当IPTG浓度为3mmol/L,诱导表达到最长时间9h时,VPl蛋白表达量最大。本实验的结果可以为以后大量表达重组蛋白VPl,及生产诊断试剂和疫苗产品提供实验依据,同时也为节省IPTG的使用量,降低生产成本,提高生产效率提供参考依据。关键词:AsiaI型口蹄疫病毒;VPl蛋白;表达;IPTG;诱导浓度与时间OptimizationandprokaryoticexpressionoftheVP1proteinofFMDV
4、typeAsiaAbstractFMDVisthecausativeagentofFMD,ahighlycontagiousdiseaseofcloven-hoofedanimals,inadditioncountriesandthepeople’Slivingbyseverelyaffected.FMDinmanycountriesseverelylimitsitstradeinanimalsandanimalsproductsduetointernationalregulationsdesignedtolimitspreadofth
5、edisease.AnditwaspaidmofeattentionbyOIE.TheVPlgeneisthemainantigenicepitopesofFMDVwhichplaysveryimportantrolesininducingneutralizationantibodiesandmakeprotectivefunction.Inthisstudy,gottheVPlproductfromrecombinantplasmidofpGEM—KZ-VPl,thenligatedtheVPlgeneofFMDVofAsiaIand
6、thepET-28aexpressionvector,thentransformedintoBL21cellsandinducedtherecombinantplasmidwithdifferentconcentrationofIPTGanddifferenttimetoexpresstheVPlprotein.TheresultsofSDS—PAGEandWesternblotdemonstratedthattheexpressedVPlproteinwasexistedintheformofinclusionbody.Analyzi
7、ngtheeffectofdifferentconcentrationofIPTGanddifferenttimeonexpressionproduct,andconfirmedthebestinducedconcentrationofIPTGandtime.ExperimentalresultsindicatedthatwhentheconcentrationofIPTGincreased,theproductshavenotincreased,andwiththetimepasttheproductsincreased.Theult
8、imaconcentrationofIPTGwas3mmol/Landtimewas9h,whichisbetterconditionwheninducedVPlprotein.Keywords:FMDVt
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