mt-nd13571ct突变与leber遗传性视神经病变的相关性研究

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1、万方数据温州医科大学硕士学位论文论文题目：丝型迪』兰墨2曼g三!塞变量坠曼坠曼!遗佳性袒袖经痘变的担差丝巫究答辩委员会主席：自鲞壅敛援(羞国徨壶薤斯划童太堂)答辩委员会成员：奎隹数援(退趔医科太堂)型悬羞数攫(温盟医料太堂≥论文答辩日期：2Q里垒生§且Q墨曼万方数据温州医科大学硕士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．4前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．9第一部分中国人群Leber遗传性视神经病变线米M4kDNA三个原发突变位点分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．15材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．15

2、结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．22分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．25第二部分MT-NDl3571C>T突变与Leber遗传性视神经病变的相关性研究⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．28结果⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．32分析及讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．39小结．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42中英文缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．46附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．48综述及参考文献⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯54独创性声明⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯67万方数据温州医科大学硕士学位论文MT-NDl3571C>T突变与Leber遗传性视神经病变的相关-I生研究中文摘要目的1．在全国范围内收集遗传性视神经病变样本，进行Leber遗传性视神经病变(Leber’shereditaryopticneuropathy,LHON)相关的线粒体DNA(mitochondrialDNA，mtDNA)原发突变位点(m．3460G>A，m．11778G>A，m．14484T>C)的筛选。2．对121例携带3个原发突变位点之一的LHO

4、N家系进行全面系统的临床评估和眼科学检查，确定每个家系的外显率和表现度，评估家系成员的临床表型(包括视力损伤程度、发病年龄、男女发病比例)。3．对LHON重点家系和正常对照进行线粒体全基因测序分析，筛查与LHON相关的候选mtDNA新突变，并绘制中国LHON人群mtDNA突变频谱。4．探讨3例携带m．3571C>T突变的LHON家系的临床、遗传和分子生物学特性，分析该突变以及线粒体单体型、核修饰因子、环境因素等对中国LHON家系外显率和表现度的影响。方法1．通过与北京、河北、福建等全国各地多家医院的合作，建立起LHON家系的全国收集网

5、络，可全面采集LHON家系和临床资料。2．对LHON家系成员进行详细的临床检查，包括病史采集，视力，色觉，视野，眼底，视觉诱发电位(VEP)等。3．使用酚．氯仿法提取患者和正常对照的全基因组DNA，PCR扩增线粒体DNA三个原发位点所在区域，纯化并测序。4．使用24对有局部重叠的引物对先证者和正常对照的mtDNA全序列进行PCR扩增、纯化及测序。5．使用相关生物软件(DNAStar、C11romas、ClustalX等)分析测序结果，筛查新变异位点和有功能意义的多态性位点，然后通过临床评估、突变造成的结构功能改变的相关分析、种系发生学

6、分析、线粒体单体型分析等方法，评估其对LHON可能的影响。结果万方数据温州医科大学硕士学位论文1．从2011年9月到2013年12月，本实验室已在全国范围内收集了363例视神经病变的样本。3个原发突变位点的筛查结果显示，121例家系携带三个原发突变位点，其中108例携带m．G11778G>A，9例携带m．14484T>C，4例携带l'r1．3460G>A。2．对121例携带原发突变位点的家系进行临床评估，发现这些家系中患者的平均发病年龄为21．3岁，视力损伤程度从轻度、中度、重度到极重度不等，男女发病比例为8．3：1。3．对未携带三个

7、原发突变位点的LHON家系行线粒体全基因组测序分析，发现3例携带m．3571C>T突变的LHON家系。4．3例携带m．3571C>T突变的LHON家系患者都表现出典型的LHON临床特征，3例家系先证者的发病年龄分别为8岁、2l岁、22岁，视力损伤程度从轻度、重度到极重度不等，外显率分别为41．7％、35．3％、20％。5．m．3571C>T位点位于高度保守区(保守系数为94．1％)，线粒体单体型分析表明，这3例家系先证者的mtDNA序列分别属于东亚单体型B4clb2，B4c，B4c。6．359例正常对照中发现3例携带m．3571C>T

8、突变。结论1．在中国LHON人群中，携带m．G11778G>A突变比例最多，m．14484T>C其次，rn．3460G>A最少。2．LHOH男性患者的比例明显高于女性，平均发病年龄为21．3岁，m．G11778G>A患者