gdnf促进多巴胺能神经细胞钙结合蛋白表达的分子信号机制研究

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1、徐州医学院硕士学位论文GDNF促进多巴胺能神经细胞钙结合蛋白表达的分子信号机制研究姓名：余景考申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：高殿帅20070401徐州医学院硕士学位论文缩略词英文全称CBcalbindinD28K缩略词表Abbreviation中文全称钙结合蛋白mialcellline-derivednetwouophicGDNF。胶质细胞系源性神经营养因子factorH202hydrogenperoxide过氧化氢NF．r．Bnuclearfactor心核因子r,BPBSphosphatebuffersali∞磷酸盐生理盐水缓冲液PBphosphatebuf

2、fer磷酸盐缓冲液PDParkinson'sdisease帕金森病THtyrosinehydroxylase酪氨酸羟化酶SDSprague—DawleyratSD大鼠SNsubstantianigra黑质SNCparscompactaofsubstantianigra黑质致密部SNLlateralpartofsubstantianigra黑质外侧部SNRparsreticulaofsubstantianigra黑质网状部TADstmscr蛳onalactivationdomains转录活性区6-OHDA6-hydroxydopamine6-羟基多巴胺徐州医学院硕士学位论文论

3、文独创性声明我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的声明并表示了谢意。作者签名：论文使用授权声明日期：2007年4月本人完全了解徐州医学院有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。徐州医学院硕士学位论文论文审阅认定书研究生：蜇；孟2}在规定的学习年限内，按照研究生培养方

4、案的要求，完成了研究生课程的学习，成绩合格；在我的指导下完成本学位论文，经审阅，论文中的观点、数据、表述和结构为我所认同，论文撰写格式符合学校的相关规定同意将本论文作为学位申请论文送专家评审。导师签名58日期：2QQZ生4目，f堕音任徐州医学院硕士学位论文GDNF促进多巴胺能神经细胞钙结合蛋白表达的分子信号机制研究中文摘要目标本研究旨在探讨PI-3IGAKT和NF．r．B信号通路是否参与了胶质细胞系源性神经营养因子(glialcelllinc-dexivezlneurotrophicfactor，GDNF)通过促进钙结合蛋白(calbindinD28K，CB)表达而保护多巴

5、胺能神经细胞的作用。方法以成年SD(Sprague-Dawleyrat)大鼠为实验动物，于其右侧纹状体注入6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6·OHDA)，注射7天后行为学筛选出早期帕金森病(Parkinson’Sdisease，PD)模型鼠。然后在此模型鼠右侧黑质致密部行立体定位注射，依据注入不同的药物将大鼠分为五组：空白组，不注入任何药物，但有手术过程；PBS组，在其右侧黑质致密部注入PBS(2山，0．01retool／L)：GDNF组，在其右侧黑质致密部注入GDNF(2m，20ng，m)；ODNF+Helenalin组，于右侧黑质致密部先注入Hele

6、nalin(2m，0．5鹏nlI；这是NF-r,B信号通路特异性阻断剂)，30分钟后，再注入GDNF；GDNF+Wortmannin组，于右侧黑质致密部先注入Wortmannin(2m，0．5I．tg／lil；这是PI-3K／AKT信号通路特异性阻断剂)，30分钟后，再注入GDNF。动物存活一定时间后处死，以免疫组织化学方法检测各组大鼠黑质致密部多巴胺能神经细胞中CB、p-AKT及p65(NF—rB／Rel家族成员)的表达；并用免疫印迹技术对胞浆中的CB、胞浆和胞核中p65进行定量检测；以免疫共沉淀技术观察模型大鼠在GDNF作用下黑质致密部多巴胺能神经细胞的胞核中p65结合

7、p50或p52(此三种成分为NF．r．B家族成员，在NF．rB信号通路激活后，相互之间能形成二聚体)的情况。结果GDNF组的CB阳性浅染细胞数明显高于空白组、PBS组、2徐州医学院硕士学位论文ODNF+Helenalin组和GDNF+Wortmannin组：并且GDNF组的CB含量也升高，但GDNF+Helenalin组和GDNF+Wortmannin组的CB含量明显低于G肼师组。GDNF组中p-AKT阳性细胞数明显多于PBS组，同时，GDNF组中胞核含p65的量升高而胞浆p65的含量下降。而在免疫共沉淀实验中，我