gdnf和e2协同保护受损da能神经细胞机制的研究

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1、徐州医学院硕士学位论文GDNF和E2协同保护受损DA能神经细胞机制的研究姓名：王萌申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：高殿帅2012-03徐州医学院硕士学位论文GDNF和E2协同保护受损DA能神经细胞机制的研究中文摘要目的有证据表明，胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)与1713．雌二醇(E2)对DA能神经细胞具有协同保护的作用，这种协同保护作用是通过激活胞内P13．K／Akt信号通路实现的，而且神经型钙粘蛋白(N．cadherin)是介导激活该信号通路的跨膜蛋白，但是在这个过程中N．cadherin如何参与并发挥其功能的尚不清楚。鉴于GDNF能够促使N．cadher

2、in的Ty卜860位点磷酸化，所以我们提出：GDNF和E2协同保护受损DA能神经细胞的机制与N．cadherin的Ty卜860位点磷酸化有关。本研究的目的即是验证之。方法本研究以体外培养的6．羟基多巴胺(6．OHDA)损伤后的MN9D细胞为研究对象，分别用脂质体转染基因干扰N．cadherin质粒、过表达N．cadherin质粒、N．cadherinTyr．860位点点突变质粒，以及pcDNA3．1空载体质粒和psilencer1．0-U6空载体质粒，另设脂质体对照组和空白对照组。然后在GDNF和E2共同作用下，利用免疫印迹检测和免疫细胞化学等方法，以MN9D细胞内N．cadh

3、erin和Akt的磷酸化水平为指标，鉴定N．cadherinTyr．860位点的作用。随后通过免疫共沉淀、免疫印迹检测和免疫细胞化学等方法，对比转染这些质粒后细胞中胞浆内与胞膜上雌激素0c受体(ERa)与N．cadherin的结合量。结果在GDNF与E2共同作用下，Ser473位点磷酸化的Akt量随着Tyr．860位点的磷酸化的N—cadherin量的改变而改变，另外ERa与N．Cadherin的结合量发生了改变，两者在膜上的结合量增加，同时胞浆中的减少，但点突变N．eadherin(Zyr．860)组中，ER仅与N．cadherin在胞膜上的结合量并没有明显增加，这种协徐州医

4、学院硕士学位论文同保护作用受到了抑制；在无GDNF与E2作用时，ERa与N．cadherin分别在胞浆胞膜中的结合量随着p．N．cadherin(Tyr一860)量的改变而发生变化，过表达组N．cadherin中ERa与N—cadherin在胞膜上的结合量最高，在胞浆中的结合量最少。结论介导GDNF和E2协同保护受损DA能神经细胞生物学作用的N．cadherin是通过其胞内段Tyr．860位点的磷酸化而实现的。关键词胶质细胞源性的神经营养因子；多巴胺能神经细胞；神经钙粘蛋白：雌激素受体徐州医学院硕士学位论文SynergisticProtectionbyGDNFandE2inIn

5、juredDopaminergicNeuronsAbstractobjectiveAccumulatingevidenceindicatesthatthesynergisticprotection．exertedbyglialcellline—derivedneurotrophicfactor(GDNF)and1713-estradiol(E2)，ondopaminergicneuronsmaybemediatedbyactivatingtheP13-K／Aktsignalingpathway,MoreoveLN—cadherinarethetransmembraneprote

6、inwhichmediatethissignalingpathway,butitisunknownhowN-cadherinplayapartinthisprocessandhowtheywork．BasedonthefactthattheGDNFleadtotheTyr一860phosphorylationinN-cadherin，wehypothesizethatthesynergisticprotectionbyGDNFandE2oninjureddopaminergicneuronsmightberelatedtothephosphorylationofTyr-860i

7、nN-cadherin．Thepurposeofthisstudyistoverifyit．MethodsTherefore，weinvestigatedtheeffectsofE2andGDNFonculturedMN9Dcellswhichwereinjuredby6-hydroxydopamine(6-OHDA)，N-cadherininterferenceplasmid，N-cadherinoverexpressionplasmid，N—cadherinTyr一860pointmut