雌激素保护6-ohda损伤的多巴胺能神经细胞的机制研究

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1、目录缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4—1￡·—l-刖吾⋯⋯⋯”⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·6材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81．材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82．方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19结论·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．23论文图片⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36综j苤⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．．41攻读硕士学位期间发表学术论文题目⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯58致谢⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯·⋯⋯·⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．59论文声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯60论文审阅认定书⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61■■}徐州医学院硕士学位论文缩略词DA英文全称dopamineDPNDiarylpropionitrileE2ERaERBFBSH202PBEstradiol缩略词表Abbreviation中文全称多巴胺2，3．二(4．羟基苯基)丙腈雌二醇EstrogenreceptorCt雌激素受体QEstrogenreceptorB雌激素受体13fetalbovineserum

4、胎牛血清hydrogenperoxide过氧化氢phosphatebuffer磷酸盐缓冲液磷酸盐生理盐水缓PBSphosphatebuffersalinePDP13．KParkinson'sdiseasephosphatidylinositol3-Kinase冲液帕金森病磷脂酰肌醇3．激酶1，3，5．三(4一羟基苯PPT1,3，5-Tris(4一hydroxyphenyl)-4一propyl一1H—pyrazole基)·4-丙基-1H-SNcTH6．oHDAparscompactaofsubstantianigratyro

5、sinehydroxylase6-hydroxydopamine吡唑黑质致密部酪氨酸羟化酶6．羟多巴胺∥I～．一、。●一●rl徐州医学院硕士学位论文雌激素保护6-0HDA损伤的多巴胺能神经细胞的机制研究中文摘要目的研究雌激素(E2)经何种受体一雌激素受体a(E鼬)和／或雌激素受体B(ERl3)一保护中脑黑质致密部(parscompactaofsubstantianigra，SNc)的多巴胺(dopamine，DA)能神经细胞，并探讨P13一K／Akt信号通路介导其作用的可能性。方法本研究以体外培养的新生l～3天的SD大鼠中

6、脑黑质脑片为研究对象，培养7天后采用免疫荧光双标染色观察DA能神经细胞中ERa、ERB的表达情况；在此基础上，再将培养的脑片分组：正常对照组和6．羟多巴胺(6-OHDA)组(2001umol／L)，6．OHDA组又分为：E2组、Wortmannin(P13．K特异性阻断剂)+E2组、雌激素受体c【激动剂(PPT)组、Wortmannin+PPT组、雌激素受体13激动剂(DPN)组、Wortmannin+DPN组，6-OHDA作用于脑片1小时后加入Wortmannin，再1小时后分别加入E2、PPT、DPN，15min后收集

7、脑片，westernblot方法检测酪氨酸羟化酶(TH)、p-Akt、Bcl一2、Bad、procaspase一3在黑质的表达情况。结果中脑脑片培养至第7天时，可见脑片边缘的细胞清晰，细胞边缘有长的突起爬出，贴壁良好。免疫荧光染色结果显示脑片SNc中有TH+细胞。免疫荧光双标染色结果显示SNc中所有TH+细胞均表达有ERa、ER13，TH+／ERa+、ER13+均为胞浆着色。westernblot方法检测TH、p-Akt、Bcl一2、procaspase一3的表达在E2、PPT及DPN组与对照组相比显著升高，而Bad的表达

8、显著降低，差异有统计学意义(P<0．05)；同时观察到PPT组较DPN组作用显著，差异有统计学意义(P<0．05)；阻断剂组与相应的未加阻断剂组相比，TH、Bcl．2、徐州医学院硕士学位论文(P<0．05)。结论在本实验条件下，雌激素、PPT及DPN对多巴胺能神经细胞均有保护作用，PPT的保护作用较DP