calbindin-d28k过表达对多巴胺能神经细胞的抗凋亡作用及其机制的研究

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1、徐州医学院硕士学位论文Calbindin-D28K过表达对多巴胺能神经细胞的抗凋亡作用及其机制的研究姓名：李富珍申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：高殿帅20090401徐州医学院硕士学位论文缩略词表Abbreviation缩略词英文全称中文全称CBCalbindin-D28k钙结合蛋白D28kDAdopamine多巴胺GDNFglialcellline-derivedneurotrophic胶质细胞系源性神经factor营养因子IKKIκBkineaseIκB激酶复合物NF-κBnuclearfactorκB核因子κBNIKNF-κBi

2、nducingkinaseNF-κB诱导激酶PBSphosphatebuffersaline磷酸盐生理盐水缓冲液PDParkinson'sdisease帕金森病PI-3Kphosphatidylinositol3kinase磷脂酰肌醇3-激酶PKB/AktproteinkinaseB蛋白激酶BSNcparscompactaofsubstantianigra黑质致密部THtyrosinehydroxylase酪氨酸羟化酶6-OHDA6-hydroxydopamine6-羟多巴胺1徐州医学院硕士学位论文论文独创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的研

3、究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的声明并表示了谢意。作者签名：日期：200年月论文使用授权声明本人完全了解徐州医学院有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。作者签名：导师签名：日期：200年月49徐州医学院硕士学位论文Calbindin-D28K过表达对多巴胺

4、能神经细胞的抗凋亡作用及其机制的研究中文摘要目的研究Calbindin-D28K（CB）对多巴胺(DA)能神经细胞的保护作用及该作用与PI-3K/Akt、NF-κB非经典信号通路之间的关系。方法以MN9D细胞（由胚胎小鼠中脑顶盖DA能神经细胞和N18TG2神经母细胞瘤细胞融合而成的细胞系，具有中脑DA能神经细胞的明显特征）为研究对象。200µM6-羟多巴胺（6-OHDA）作用于MN9D细胞30min诱导凋亡。MN9D细胞分别用质粒pcDNA3-GFP或pcDNA3-CB进行转染。未转染的MN9D细胞作为对照组。Hoechst33258染色和双变量

5、流式细胞仪检测细胞的凋亡率。In-cellWesternAssay检测MN9D细胞内过表达Calbindin-D28K时，Akt、p-Akt和p-p100的表达情况。结果Hoechst33258染色和双变量流式细胞仪检测到，过表达的CB能够抑制6-OHDA诱导的细胞凋亡，凋亡率从35.1%(转染质粒pcDNA3-GFP组)降低到15.9%（转染质粒pcDNA3-CB组）；6-OHDA损伤的细胞与未受6-OHDA损伤的细胞相比，各组中总的Akt表达水平降低，但差异无统计学意义；不论是受损伤细胞还是未受损伤细胞，转染pcDNA3-CB组中磷酸化Akt

6、的表达明显高于对照组和转染pcDNA3-GFP组，差异有统计学意义；各组中磷酸化p100的表达无明显变化。结论Calbindin-D28K拮抗6-OHDA的毒性作用而保护DA能神经细胞；Calbindin-D28K过表达时影响了PI-3K/Akt信号通路的激活，但不影响NF-κB非经典信号通路。关键词Calbindin-D28K；PI-3K/Akt；NF-κB非经典信号通路；6-羟多巴胺；MN9D细胞；多巴胺能神经细胞2徐州医学院硕士学位论文StudyontheAnti-apoptoticEffectofCalbindin-D28KOverexp

7、ressiononDopaminergicNeuronsandItsMechanismAbstractObjectiveToinvestigatetheprotectionofCalbindin-D28K（CB）todopaminergic(DA)neuronsandtoexploretherelationshipbetweentheprotectionandtheactivationofPI-3K/Akt,NF-κBnon-canonicalsignalpathways.MethodsMN9Dcells(afusioncelllineestab

8、lishedfromembryronicmesencephalictectumdopaminergicneuronsbyasomatic