nf-κb非经典信号通路介导gdnf对da能神经细胞保护作用机制的研究

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1、徐州医学院硕士学位论文NF-κB非经典信号通路介导GDNF对DA能神经细胞保护作用机制的研究姓名：钮洪艳申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：高殿帅20090401徐州医学院硕士学位论文缩略词表Abbreviation缩略词英文全称中文全称DAdopamine多巴胺FBSfetalbovineserum胎牛血清glialcellline-derivedneurotrophic胶质细胞系源性神经营养GDNFfactor因子H2O2hydrogenperoxide过氧化氢IKKαIκBkineaseαIκB激酶αIAPsInh

2、ibitorofapoptosisprotein凋亡抑制蛋白LTβlymphotoxinβ淋巴细胞毒素βNIKNF-κBinducingkinaseNF-κB诱导激酶NF-κBnuclearfactorκB核因子κBPDParkinson'sdisease帕金森病SNcparscompactaofsubstantianigra黑质致密部TADtranscriptionalactivationdomains转录激活结构域THtyrosinehydroxylase酪氨酸羟化酶6-OHDA6-hydroxydopamine6-羟多巴胺

3、1徐州医学院硕士学位论文论文独创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的声明并表示了谢意。作者签名：日期：200年月论文使用授权声明本人完全了解徐州医学院有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。作者签名：导师

4、签名：日期：200年月68徐州医学院硕士学位论文论文审阅认定书研究生在规定的学习年限内，按照研究生培养方案的要求，完成了研究生课程的学习，成绩合格；在我的指导下完成本学位论文，经审阅，论文中的观点、数据、表述和结构为我所认同，论文撰写格式符合学校的相关规定，同意将本论文作为学位申请论文送专家评审。导师签名：日期：200年月69徐州医学院硕士学位论文NF-κB非经典信号通路介导GDNF对DA能神经细胞保护作用机制的研究中文摘要胶质细胞系源性神经营养因子（gliacellline-derivedneurotrophicfactor,

5、GDNF）是迄今所知对中脑黑质致密部(substantianigraparscompacta,SNc)多巴胺（dopamin,DA）能神经细胞起特异性保护和促存活作用最强的神经营养因子。过去我们证实DA能神经元中存在NF-κB非经典信号通路，并且GDNF能够激活该通路。为了进一步探索NF-κB非经典信号通路是否介导GDNF对DA能神经细胞的保护作用，是否通过影响Bcl-2家族蛋白的表达而实现其保护作用。本研究以MN9D细胞（一种由胚胎小鼠中脑顶盖DA能神经细胞和N18TG2神经母细胞瘤细胞融合而成的细胞系，表现出中脑DA能神经细

6、胞的明显特征）为研究对象，采用Hoechst33258核染色和流式细胞仪方法检测细胞凋亡率。应用In-cellwesternAssay分析MN9D细胞中目的蛋白的表达水平。结果显示，MN9D细胞凋亡率随6-hydroxydopamine（6-OHDA）作用浓度的增加而增加，200µM的6-OHDA作用30分钟后24小时可导致38%的细胞凋亡。在6-OHDA损伤前两小时给予GDNF（50ng/ml）预处理，可使MN9D细胞的凋亡率从38%降低至16%。而在阻断NF-κB非经典信号通路后，GDNF降低细胞凋亡率的作用减弱。同时In-

7、cellwesternAssay的结果也显示，不管是阻断还是不阻断NF-κB非经典信号通路，GDNF对正常的MN9D细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-w和促凋亡蛋白Bad、Bax的表达均没有明显的影响。而在损伤的MN9D细胞中，不阻断NF-κB非经典信号通路的情况下，GDNF预处理能够上调Bcl-2、Bcl-w及下调Bad、Bax蛋白的表达。而在阻断了NF-κB非经典信号通路后，GDNF上调Bcl-2、Bcl-w表达的作用减弱，尤其对Bcl-2的作用更为明显。而对GDNF下调Bad、Bax蛋白表达的作用没有明显2徐州医学院硕士

8、学位论文的影响。因此，这些结果说明，GDNF能够保护受损的MN9D细胞，并且NF-κB非经典信号通路参与介导这一神经保护作用，该通路介导GDNF上调受损MN9D细胞中Bcl-2、Bcl-w两种促存活蛋白的表达，而对Bad和Bax蛋白的表达似乎没有明显影响。关键词