伊立替康长循环纳米脂质体的制备、质量标准及体外抗肿瘤作用研究

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1、分类号UDC硕士学位论文密级伊立替康长循环纳米脂质体的制备、质量标准及体外抗肿瘤作用研究PreparationandQualityof

2、rinotecanLong·-circulatingNanoliposomesandstudyofitsinvitroantitumoractivity作者姓名：何颖学科专业：药剂学学院(系、所)：药学院指导教师：陈玉祥中南大学二零一二年五月一令一一平丑月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南

3、大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：盛拯日期：丝年』月翌日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。储虢盟廷翩签名纵：丝年￡月望日硕士学位论文中文摘要摘要目的：制备伊立替康长循环纳米脂质体，对制备方法

4、进行筛选，并对伊立替康长循环脂质体的处方及制备工艺进行优化，确定最佳的制备方案。根据最佳制备方案制各样本，并对伊立替康长循环脂质体的各项质量标准进行考察研究。以结直肠癌细胞SW480，肝癌细胞HepG2，乳腺癌细胞MCF．7为细胞模型，考察游离伊立替康、空白长循环脂质体、伊立替康长循环脂质体对上述三种细胞的细胞毒性，并应用荧光染色法考察伊立替康长循环脂质体对MCF．7细胞形态的影响，为该纳米剂型应用于临床提供有效的试验数据。方法：(1)伊立替康长循环纳米脂质体的制备本实验考察了不同的制备方法对脂质体粒径和包封率的影响，确定了制备方法为乙醇注入．硫酸铵梯度主动载药法。然后通过单因素考察

5、和正交试验设计确定最佳制备工艺。(2)伊立替康长循环纳米脂质体的质量控制与评价研究按照最佳处方制备伊立替康长循环纳米脂质体样本，分别考察脂质体的粒径、形态、电位、稳定性、体外释药等质量标准。(3)伊立替康长循环脂质体的体外抗癌活性研究选取结直肠癌细胞SW480，肝癌细胞HepG2，乳腺癌细胞MCF．7为细胞模型，通过MTT法检测伊立替康长循环脂质体对各种细胞的硕士学位论文中文摘要杀伤能力。采用荧光染色法，考察伊立替康长循环脂质体对人MCF．7细胞形态及凋亡的影响。结果：(1)伊立替康长循环纳米脂质体的制备选择乙醇注入．硫酸铵梯度主动载药法制备的伊立替康长循环脂质体粒径小且分布均匀，包

6、封率高。确定的最佳处方为：磷脂300mg，使其浓度为10mg／mL，胆固醇100mg，55℃水浴通N2搅拌条件下逐滴加入到0．2mol／L的溶解了PEG400030mg，泊洛沙姆60mg的硫酸铵溶液中，硫酸铵水化介质与乙醇体积比为3：1，55℃水浴通N2条件下保温搅拌20min除去有机溶剂，得到空白长循环脂质体。将所得空白脂质体在生理盐水中透析12h，除去外水相中的硫酸铵，形成内外硫酸铵梯度，将伊立替康溶液(卵磷脂：伊立替康=10：1)加入空白脂质体中，55。C下孵育载药10min，即得伊立替康长循环纳米脂质体。(2)伊立替康长循环纳米脂质体的质量控制与评价研究根据最佳制备工艺制备的

7、脂质体，粒径在110nlTl左右，形态成圆形、分布均匀、电位在一15mV左右，包封率达到92％，稳定性好，在体外缓慢释药，符合Wreibull方程lnln[100／(100．Q)]=0．3845Int一1．2134，R2=O．9747．(3)伊立替康长循环脂质体的体外抗癌活性研究与游离伊立替康溶液相比，伊立替康长循环脂质体对人直肠癌细胞SW480，肝癌细胞HepG2，乳腺癌细胞MCF一7有明显的抗肿瘤活硕士学位论文中文摘要性，并能够改变细胞的形态，促进细胞发生凋亡。结论：制备的伊立替康长循环脂质体保护了伊立替康的内酯环结构，延长了药物的作用时间，提高了药物的抗肿瘤活性。本实验可为制备

8、脂质体提供一种新方法，并为伊立替康脂质体应用于临床提供有效的临床前实验数据，具有广阔的应用前景。关键词：伊立替康长循环脂质体，质量评价，抗癌活性，细胞凋亡1国家863计划项目的资助，课题名称为”长循环靶向缓释纳米脂质体抗肿瘤药物制剂的产业化”，编号为2007AA021810III硕士学位论文英文摘要Purpose：ABSTRACTTooptimizetheformationofirinotecanloadedlongcirculationlipsome，a