铱(III)配合物长循环脂质体的制备及体外抗肿瘤活性的研究

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1、广东药科大学硕士研究生学位论文分类号：___________密级：__________UDC：___________铱(III)配合物长循环脂质体的制备及体外抗肿瘤活性的研究姓名：许丹翘学号：2111540039院系：药学院学位类型：学术学位专业：药剂学研究方向：药物新剂型的研究导师：郭波红副教授论文提交日期：2018年5月28日论文答辩日期：2018年5月14日学位授予单位：广东药科大学二〇一八年五月广东药科大学硕士研究生学位论文Studyonpreparationandinvitroantitum

2、oractivityofiridium(III)complex-loadedlong-circulatingliposomesCandidate：DanqiaoXuStudentID：2111540039Affiliation：SchoolofpharmacyAcademicDegreeApliedfor：MasterofMedicineSpeciality：PharmaceuticsSupervisor：Prof.BohongGuoDayofDefence：May2018Degree-Conferr

3、ing-Institution：GuangdongPharmaceuticalUniversity52018广东药科大学硕士研究生学位论文铱(III)配合物长循环脂质体的制备及体外抗肿瘤活性的研究摘要本文建立铱(III)配合物[Ir(ppy)2(BTCP)]PF6(Ir)的反相离子对高效液相色谱(HPLC)分析方法；采用低速-超速离心法分离脂质体与未包封的药物，建立脂质体包封率和载药量测定方法。测定Ir在pH7.4的PBS缓冲溶液和不同浓度Tween-80溶液中的平衡溶解度，为设计脂质体处方、确定工艺

4、条件和体外释放试验提供参考依据。采用薄膜分散-超声法制备铱(III)配合物长循环脂质体(Lipo-Ir)，分别对磷脂的种类、磷脂与胆固醇的质量比、磷脂与Ir的质量比、磷脂浓度以及其他工艺参数等影响因素进行考察。以包封率、载药量和平均粒径为指标，以磷脂与药物质量比(X1)、磷脂与胆固醇质量比(X2)和磷脂浓度(X3)为考察对象，采用3因素3水平的Box-Behnken设计优化Lipo-Ir处方。所得最佳处方为:X1=12.39:1，X2=10.03:1，X3=9.48mg/mL。最佳处方制备的脂质体包封

5、率为92.66±1.79%，载药量为5.50±0.85%，粒径为116.57±1.15nm，PDI值为0.19±0.02，Zeta电位为-10.66±0.61mV。采用冷冻干燥技术制备铱(III)配合物长循环冻干脂质体(FD-Lipo-Ir)，重点考察不同冻干保护剂对脂质体的保护作用，确定最佳冻干保护剂处方为蛋黄磷脂：海藻糖：甘露醇=1:1:1(w/w)。冻干脂质体水化后粒径为154.20±2.57nm，PDI值为0.193±0.08，Zeta电位I广东药科大学硕士研究生学位论文为-7.03±0.11

6、mV，冻干前后脂质体包封率无明显变化，体外释放行为与冻干前脂质体相似，符合一级动力学方程，具有缓释性。4℃储存下FD-Lipo-Ir在3个月内稳定性良好。采用MTT比色法检测Lipo-Ir对A549细胞的体外细胞毒性，结果显示Lipo-Ir具有良好的抗肿瘤活性。利用AO/EB、Hoechst33342染色观察A549细胞凋亡形态的变化。活性氧水平(ROS)、线粒体膜电位和细胞内钙离子浓度检测试验表明，Lipo-Ir能升高细胞内ROS水平，使线粒体膜电位去极化，并增大细胞内钙离子浓度。此外，Lipo-I

7、r可以使A549细胞周期阻滞在G0/G1期。综合实验结果推测Lipo-Ir通过ROS介导的线粒体凋亡途径诱导A549细胞发生凋亡。本研究构建的PEG修饰铱(III)配合物脂质体能够在一定程度上丰富抗肿瘤金属配合物新剂型制备的基础理论，具有良好的研究和应用前景，并为新型高效抗肿瘤药物制剂的开发研制提供新思路。关键词：铱(III)配合物；长循环脂质体；冷冻干燥；抗肿瘤II广东药科大学硕士研究生学位论文StudyonPreparationandinVitroAntitumorActivityofIridiu

8、m(III)Complex-LoadedLong-CirculatingLiposomesABSTRACTTheion-pairreversed-phasehighperformanceliquidchromatographymethodwasestablishedtodeterminetheconcentrationofIridium(III)complex([Ir(ppy)2(BTCP)]PF6;abbreviatedasIr).Determinat