亚低温联合神经干细胞移植治疗小鼠缺氧缺血性脑病模型的实验研究

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1、万方数据亚低温联合神经干细胞移植治疗小鼠缺氧缺血性脑病模型的实验研究作者姓名指导教师姓名学科(专业)答辩日期资助基金项目研究方向申请学位级别培养单位王林马杰外科学2012年”月上海优秀学科带头人计划00XDl403300千细胞治疗缺氧缺血脑病的基础研究博士学位上海交通大学附属新华医院万方数据MildHypothermiaEnhancedthePotentTherapeuticEffectofNeuralPrecursorCellTransplantationinaNeonatalMouseModelofCerebralHypoxia·-ischemiaAuthornamelnstru

2、ctornameDiSCiPIinesRepIydateFundedWangLinMaJieSurgeryOctober。2012FundoutstandingacademiCIeadersPlan(09XDl403300)ResearchdirectionceItherapytoAppIyforDeveIopMRitshypoxlC—lschemIC■●■encephaIopathyPhiIosophiaeDoctor(Ph．D)XinhuaHospitaIAffiIiatedtoShanghaiJiaotongUniversity万方数据上海交通大学学位论文原创性声明IIJIII

3、IIIIIIIPIIIIIIIJlJllllllIIIIIIIIJlIY2722140本人郑重声明：所里交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：矿矿f缉’7月79日万方数据上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人

4、授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于7不保密囤。(请在以上方框内打“4”)指导教师签名：日期：年月日m婶名月签U者．孚储律文7讼：位期学日万方数据中文摘要1目的1．1观察体外培养小鼠神经干细胞(NSCs)分化为神经元样细胞的电生理特征。1．2NSCs植入缺氧缺血性脑病(hypoxic—ischemicencephalopathy，HIE)小鼠脑内，分析其分化为神经元样细胞的电生理特征，探讨NSCs治疗HIE小鼠可能机制，并行安全性评估。1．3应用

5、亚低温联合NSCs移植治疗小鼠缺氧缺血性脑病(HIE)，观察其疗效，探索皿低温改善NSCs治疗HIE小鼠的可能机制。2方法2．1体外分离并培养胚胎来源NSCs，探索其分化潜能，并进行电生理功能鉴定。2．2将小鼠随机分为三组：SHAM组(假手术组)；HIE+PBS组(安慰治疗组)；HIE+NSCs组(治疗组)。分别进行移植细胞的追踪鉴定，行为学的评价及安全性评估2．3将小鼠随机分为五组：对照组(control组)：HIE+hypothermia组(亚低温治疗组)：HIE组：HIE+NSCs+hypothermia组(亚低温联合NSCs治疗组)：HIE+NSCs组(常温治疗组)。分析比较

6、不同组问差异。3结果3．1C57／BL6胎鼠来源的NSCs呈单一细胞贴壁生长，并表达Nestin，Sox-2多能干性标记物。贴壁培养的细胞在分化培养基培养后，原有的单一形态发生变化。分化的神经细胞分别表达NeuN，GFAP，CNPase神经元，星形胶质细胞与少突胶质细胞标记物。其中，神经元样细胞的静息膜电位及全细胞电容值与未分化的状态相比较有明显差异(p

7、IE+NSC组(治疗组)第l与4周相比较，差万方数据异没有统计学意义。接受移植的新生鼠脑组织可见GFP标记阳性同时表达NeuN，GFAP，CNPase标记双阳性细胞，分别约占植入细胞比例的1l、14％，63’77％和2’6％左右。4wek时GFP标记阳性细胞较1week时减少60％左右。其中，神经元样细胞的静息膜电位，膜输入阻抗及全细胞电容值与体外培养的神经元样细胞相比较没有明显差异。同时可记录到Na+动作电位和自发兴奋性突触后电流。RotarodTest