化疗后骨髓再生细胞移植治疗大鼠缺氧缺血性脑病的实验研究

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1、上海交通大学硕士学位论文化疗后骨髓再生细胞移植治疗大鼠缺氧缺血性脑病的实验研究姓名：张重功申请学位级别：硕士专业：外科学（神外）指导教师：马杰20070501上海交通大学医学院硕士学位论文上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日2上海交通大学医学院硕士学位论文上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论

2、文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日3上海交通大学医学院硕士学位论文摘要围产期窒息所致缺氧缺血性脑病（hypoxic-ischemicencepholopathy,HIE）是新生儿期危害最大的常见病之一，常引起新生儿死亡和神经系统发育

3、障碍。目前临床上尚无有效的治疗药物和方法，因此探讨HIE新的治疗方法具有十分重要的意义。骨髓干细胞(bonemarrowstemcellsBMSCs)指来源于骨髓的具有分化潜能的细胞，亦称骨髓衍化细胞，主要包括造血干细胞(hematopoieticstemcells，HSCs)、骨髓间充质干细胞(bone－mesenchymalstemCellsBMSCs)和内皮前体细胞（endothelialcellprogenitorsECP）等。作为神经移植的来源细胞,BMSCs具有独特的优越性,体内实验证明BMSCs能明显改善缺血大鼠的神经功能，其可能机制主要为分泌多种营养因子和细胞因子，从而激活内

4、源性修复机制促进神经修复和功能恢复。5－氟尿嘧啶（5－Fu）预处理后的大鼠，其BMSCs各种营养因子表达量明显增加，尤为各种促血管生长因子，称之为骨髓再生细胞（BoneMarrowRegenerativeCells，BMRCs）。BMRCs植入HIE大鼠脑内后，能否存活、迁移至损伤部位？能否激活内源性修复机制从而促进神经修复和功能恢复？与普通BMSCs相比，是否具有更大的治疗潜能？为此，进行了以下研究.本实验的目的在于探讨BMRCs移植后对HIE大鼠神经功能恢复的影响，并进一步探讨这此种细胞在治疗HIE中的价值及可能的机制。实验方5上海交通大学医学院硕士学位论文法：制作新生大鼠HIE模型，随

5、机分为假手术组、PBS治疗组(HIE/PBSgroup)、骨髓干细胞移植组(HIE/BMSCsgroup)、骨髓再生细胞移植组(HIE/BMRCsgroup)。HIE模型制作后后第3天，分别将3微升PBS、DAPI标记后的BMSCs及BMRCs经右侧侧脑室移植入HIE大鼠脑内。各组大鼠分别于移植后第三周进行行为学检测，并应用荧光激发检测移植的细胞在脑内存活情况，采用HE染色和免疫组化法检测缺血区病理改变及新生的血管，用RT-PCR法检测VEGF-mRNA的表达情况，用TUNEL法检测细胞凋亡。实验结果：本模型稳定可靠、重复性好。行为学检测提示，BMRCs治疗组的感觉运动功能明显改善（P<0.

6、05）。经PCR检测发现，BMRCs治疗后的大鼠，其脑内VEGF-mRNA表达量明显增加，在其后的免疫组化检测及原位杂交检测中，我们进一步发现治疗后大鼠脑内新生血管明显增多、凋亡细胞显著减少。实验结论表明：成功建立HIE大鼠模型。BMRCs植入HIE大鼠脑内后，能存活、迁移至损伤部位，并表达大量营养因子，进而促进血管新生、抑制凋亡、改善感觉运动功能。BMRCs侧脑室移植治疗HIE是一种有效的治疗方法。关键词：骨髓干细胞，骨髓再生细胞，移植，缺血缺氧性脑病，凋亡6上海交通大学医学院硕士学位论文TRANSPLANTATIONOFBONEMARROWREGENERATIVECELLSAFTERCH

7、EMOINRATMODELOFHIEABSTRACTHIEcausedbyasphyxiainperinatalstageisthecommondiseasethatbegetthemostdamageintheneonatalperiod,whichoftenbringaboutthedeathofneonatalorthedisfunctionofnervoussystem.Uptonow,noeffec