缺氧预处理后骨髓源神经干细胞联合bdnf治疗大鼠脑梗塞模型的实验研究

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1、分类号：R743.3密级：公开UDC：610编号：2015121002011212012级攻读硕士学位研究生毕业论文缺氧预处理后骨髓源神经干细胞联合BDNF治疗大鼠脑梗塞模型的实验研究InfluenceofhypoxiapreconditioningoninfarctiontreatmentbyneuralstemcellsofbonemarrowjointBDNFinratsmodel指导教师：吴世政教授学生姓名：雷延成论文类型：应用基础研究学科专业名称：内科学(神经病学)研究方向：缺氧预处理与脑血管病学院(系、部)：青海大学研究生院论文起止时间：2014.6—2015.5

2、QinghaiUniversityMasterDissertationInfluenceofhypoxiapreconditioningoninfarctiontreatmentbyneuralstemcellsofbonemarrowjointBDNFinratsmodelSupervisor:Prof.ShizhengWuCandidate:YanchengLeiAcademicMajorApplidedfor:Internalmedicine(Neurology)SpecificMajor:BasicMedicalResearchCollege(Department):

3、QinghaiuniversityMay,2015独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权青海大学大学可以将本学位论文的全部或部分内容编

4、入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本论文属于：保密□不保密(请在相应方框内打“√”)，在_____年解密后适用本授权书。学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日青海大学硕士学位论文摘要缺氧预处理后骨髓源神经干细胞联合BDNF立体定向移植治疗大鼠脑梗塞损伤的研究研究生：雷延成指导教师：吴世政教授摘要目的：研究缺氧预处理后骨髓源神经干细胞(BMSCs-NSCs)联合脑源性神经生长因子(BDNF)立体定向移植治疗大鼠脑梗塞损伤的疗效；以及BMSCs-NSCs在体内外分化的特性，为高原地区脑梗塞的细胞移植治疗提供动物实验基

5、础。方法：将72只SD大鼠随机分为缺氧预处理组和常氧两大组各36只，缺氧预处理组造模前先行急性低氧预处理(HPC)(模拟海拔5000m高度的低压氧舱行3d，每天3h)，大脑中动脉阻塞再灌注(MCAO/R)模型成功后每个大组再分成三个亚组，每个亚组各12只，A组：BMSCs-NSCs+BDNF移植组；B组：BMSCs-NSCs移植组；C组：对照组(仅注射DMEM/F12培养基)。分别通过立体定向仪移移植入梗塞同侧尾状核内，并于3、7、14、21、28、35d进行神经功能缺损评分(包括平衡木测试、行走测试、抓握测试)，断头取脑后再从形态学(梗死灶大小的变化)及组织学(免疫组织化学

6、及免疫荧光染色)了解骨髓源性神经球分化情况，进行疗效观察。结果：1．BMSCs在体外联合应用碱性成纤维生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)及B27诱导下形成的细胞球经CD133和Nestin检测证实为BMSCs-NSCs(本实验诱导成功)。2.BMSCs-NSCs经Nestin、MAP-2、GFAP、Galc抗原免疫荧光染色均呈阳性表达，证实SD大鼠BMSCs-NSCs在体外均能分化为神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞。3.体外BMSCs-NSCs分裂速度与培养基胎牛血清(FBS)相关，10%FBS和10%FBS+50ng/mLBDNF组分化为神经元比例分别为(22±

7、2.4)个，(31±1.7)个，(P<0.01)，故添加BDNF可提高分化为神经元比例，荧光倒置显微镜下观察到添加BDNF后BMSCs-NSCs突触数目增多、长度增加，并促进连接。4.移植后大鼠神经功能第14d即开始明显改善，而第21d梗塞区迁移入Badu阳性表达细胞最多，但这些标志物的表达仍主要集中于细胞移植区，以GFAP表达阳性的星形胶质细胞为主。5.缺氧各组与对应常氧各组各检测指标间无显著性差异(P＞0.05)。无论缺I青海大学硕士学位论文摘要氧处理组、还是常氧组，BMSCs-NSCs+BDNF组