骨髓干细胞移植治疗大鼠糖尿病足促进血管新生的初步实验研究

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1、骨髓干细胞移植治疗大鼠糖尿病足促进血管新生的初步实验研究计：学位论文：34页表格：5个插图：9幅王颖慧指导教师：练诗梅教授申请学位级别：硕士学位专业名称：内科学论文提交日期：2012年4月论文答辩日期：2012年5月学位授予单位：大连医科大学学位授予日期：2012年6月评阅人：答辩委员会主席：独创性声明删本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材

2、料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：左鑫彗签字目期：超￡兰年旦月丑日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯OOQOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(一)日IJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”⋯⋯⋯⋯⋯⋯。(二)第一部分大鼠2型糖尿病足模型

3、的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8(三)第二部分骨髓干细胞移植治疗大鼠糖尿病足新生血管密度观察及其VEGF、Ang．1表达水平的实验研究⋯13(四)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯000⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22(五)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯”⋯·OaoO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23三、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OODOOOOOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯DOOOOO⋯26(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31四、附录⋯⋯⋯OOOOOOOOOOOOOOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3

4、3五、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34骨髓干细胞移植治疗大鼠糖尿病足促进血管新生的初步实验研究硕士生姓名：指导教师：专业名称：王颖慧练诗梅教授内科学摘要目的：建立一种简单的、稳定的大鼠糖尿病足模型，应用骨髓干细胞(bonemarrowstemcell，BMSC)移植治疗大鼠糖尿病足，观察其治疗效果。应用免疫组化技术评价治疗后患肢局部肌肉组织微血管密度，并检测血管内皮生长因子(vascularendotllelialcellgrowthfactor，VEGF)表达水平；应用逆转录一聚合酶链反应(Revers

5、etmnscription．Polymerasechainreaction，I汀一PCR)技术检测血管生成素I(angiopoietin，Ang—I)表达水平。方法：1．健康雄性Wistar大鼠30只，随机分为实验组(n=25)与对照组(n_5)，高糖高脂饮食喂养4周。2．实验组大鼠给予腹腔注射链脲佐菌素(STZ)45mg／kg，对照组给予腹腔注射与实验组同等剂量的柠檬酸一柠檬酸钠缓冲液；3天后测量空腹血糖，血糖>16mmol／1为糖尿病模型造型成功。3．糖尿病成模大鼠予以行左下肢股动脉结扎术，建立糖尿病足模型。4．常规取健康Wi

6、star鼠股骨、胫骨骨髓血，应用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞(bonemarrowmononuclearcell，BMMNC)。5．配SU×106／mlBMMNC悬液以备用。6．将糖尿病足成模鼠8只随机分为3组，组(n=6)为鼠模型非治疗组；B组(n=6)为鼠模型治疗组，予BMMNC悬液注射；C组(n=6)为鼠模型假治疗组，予注射PBS液。7．监测3组大鼠不同时间的空腹血糖、体重、饮水量以及尿量变化。于干细胞局部移植治疗28天后取缺血下肢局部肌肉组织，制作切片，行免疫组织化学染色，评价血管密度、检测VEGF表达水平，并应用RT

7、．PCR技术检测Ang．I在缺血患肢局部的表达水平。结果：1．25只实验组大鼠注射STZ3天后，有19R大鼠空腹血糖≥16mmol／1，并有多饮、多尿、多食、消瘦等症状；补注STZ7天后全部大鼠血糖≥16mmol／l。死亡4只。21只糖尿病成模鼠行左下肢股动脉结扎术6d后，5只死亡，余16只作为DF鼠模型进入第2部分实验，死亡4只，共12只完成实验全过程。所有鼠模型股动脉结扎3天后，缺血后肢均逐渐出现不同程度的萎缩以及活动力下降。所有鼠模型在处死取材时，缺血后肢均无明显坏疽出现。2．BMMNC患肢局部移植后免疫组化染色vWF计数微

8、血管，A组4．667+0．577，B组7．25+0．5，C组4．3+0．819。B组微血管数量明显高于A、C两组，P