大鼠骨髓间质干细胞和新鲜骨髓细胞静脉移植治疗脑梗

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1、大鼠骨髓间质干细胞和新鲜骨髓细胞静脉移植治疗脑梗【摘要】目的比较大鼠骨髓间质干细胞(rMSC)和新鲜骨髓细胞(fBMC)静脉移植后在脑梗死时脑内存活、迁移及分化情况,及对神经功能恢复的影响。方法制备大鼠脑梗死模型,经尾静脉将标记的rMSC和fBMC植入体内,于不同时程对神经功能状况进行评分。应用荧光激发及免疫组织化学方法检测移植细胞在脑内存活、迁移及分化情况。细胞化学染色观察rMSC体外分化情况。结果与对照组比较,两移植组神经功能改善明显(P<0.001),组间mNSS评分比较无统计学意义(P>0.05)。两移植组在

2、荧光激发下均可见移植细胞在梗死区及其周边区聚集并存活,且有部分植入细胞分化表达神经细胞表面标志物,在体外rMSC未见类似分化表达。两组植入细胞存活与分化标志表达率差别无统计学意义。结论rMSC和fBMC经静脉移植后在宿主脑内均能够存活、迁移并分化表达神经细胞表型,均有促进脑梗死后神经功能恢复的作用。【关键词】间质干细胞移植;骨髓细胞;脑梗死;疾病模型,动物ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatethatratmesenchymalstemcells(rMSC)andfreshbonemarroigratet

3、oinfarctfocus,survive,differentiateintonervecells,andimproveneurologicalfunctionaftercerebralischemiainadultrats.MethodsrMSCaleSDratsiddlecerebralarteryocclusion(MCAO).rMSCorfBMCorPBSeasurementsusingthemodifiedneurologicalseverityscores(mNSS)edat24hour,1munohistochem

4、icalstainingandlaserscanningmicroscopybonemarroarkingproteinofneuronsandglialcellmunocytochemistryinvitro.ResultsrMSCproliferatedrapidlyinvitro.ThereprovementinratstreatedNSSscores(P<0.001).TheresnotsignificantdifferenceinmNSSscoresbeticcoreanditsboundaryzone,anda

5、feicareaofthebrain,andsomecellsexpressedthephenotypicproteinmarkerofneuralcells.BothintravenousadministrationsofrMSCandfBMCcanpromotetheneurologicalfunctionalimprovementinratstrokemodel.KEYSC)在体内外条件的诱导下可以分化为神经细胞,对神经损伤后功能恢复有一定治疗作用［1-3］。笔者前期工作证实MSC移植对大鼠脑梗死后神经功能恢复有作用［4］

6、。有研究表明,新鲜骨髓细胞(fBMC)移植入鼠体内可分化出神经细胞标志物,神经功能也得到一定恢复［5-7］。若静脉移植MSC和fBMC具有同样的治疗作用,则无疑直接移植fBMC更方便,更有实用价值。因此,笔者将相同数量的大鼠骨髓间质干细胞(rMSC)与fBMC经静脉移植到大脑中动脉栓塞(MCAO)的大鼠体内,观察两类细胞在大脑缺血灶微环境中存活迁移及分化情况,并比较两者在改善大鼠中风后神经功能损害方面的作用效果。1材料与方法1.1材料1.1.1动物清洁级雄性SD大鼠由福建医科大学实验动物中心提供［实验动物质量许可证号:SGXK(

7、闽)2004-0002;使用许可证号:SYXK(闽)2004-0007］,2～3月龄,体质量280～320g。1.1.2试剂α-MEM培养液(美国Gibco公司);胎牛血清(FBS,美国Hyclone公司);Ficoll-Paque淋巴细胞分离液(美国Pharmacia公司);0.25%胰蛋白酶(Trypsin1∶250,美国Amersco公司);荧光染料(celltrackerorange,CTO,美国Invitrogen公司);小鼠抗大鼠巢蛋白(Nestin)多克隆抗体、小鼠抗大鼠神经丝蛋白(NF-200)多克隆抗体及兔抗大

8、鼠神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)多克隆抗体、SABC-FITC免疫组织化学试剂盒(武汉Boster公司)，PV-6001/2试剂盒(北京中山试剂公司)。1.2方法1.2.1rMSC和fBMC制备取2月龄大鼠双侧股骨和胫骨的骨髓,分离单核细胞体外培养,消化传代。